硫磺熏蒸对菊花化学成分、吸收及代谢影响研究

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1目的制备了不同剂量硫熏亳菊样品,考察硫用量对亳菊化学成分影响及影响机制。同时,从体外肠吸收和大鼠体内代谢两个方面研究比较硫磺熏蒸与热风干燥杭菊和亳菊的吸收代谢情况,阐述硫磺熏蒸对菊花有效成分吸收代谢影响。在此基础上,开展了硫磺熏蒸与热风水提物抗氧化应激研究。最后对亳菊硫熏替代干燥工艺进行优选。2方法2.1硫熏剂量对菊花成分影响及其机制研究模拟亳菊硫磺熏蒸实验,制备不同剂量硫熏亳菊样品,评价硫用量与化学成分-酶活性-SO2残留之间的相关性。2.2体外肠吸收研究选用大鼠空肠进行肠囊外翻实验,得到硫磺熏蒸与热风干燥菊花肠吸收液,肠吸收液处理后,采用UPLC-MS和HPLC对其进行定性和半定量比较研究。2.3体内代谢研究对大鼠进行颈静脉插管造模,口服给予硫磺熏蒸与热风菊花水提物后,采用自动取血仪于不同时间点采集血液,血液4?C离心得到血浆,血浆样品经盐酸和乙腈处理沉淀蛋白。建立了UPLC-MS分析方法对血浆中的10种化合物进行定量比较研究,并描述其药代动力学参数。2.4抗氧化应激研究以氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人血管内皮细胞(HUVEC)为研究对象,初步探讨不同菊花水提物对ox-LDL引起的HUVEC氧化损伤的保护作用。2.5亳菊干燥工艺研究自制不同加工工艺亳菊样品,采用HPLC对不同加工工艺亳菊中的7种主要化学成分进行定量比较,同时,采用DPPH,ABTS和FRAP 3种体外抗氧化模型,对不同加工工艺亳菊醇提物的抗氧化活性进行比较研究。在此基础上,采用UPLC-QTof-MS对不同加工工艺亳菊进行定性比较分析。3结果3.1硫熏剂量对菊花成分影响及其机制研究结果本章研究结果表明,不同剂量硫熏亳菊样品,绿原酸、木犀草苷和异绿原酸A的含量随着硫用量的增加而增加;而芹菜素、香叶木素和金合欢素的含量随着硫用量的增加而降低。同时发现各剂量硫熏亳菊中多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)活性明显降低,且随着硫用量的增加POD酶活性逐渐降低。3.2体外肠吸收结果本章研究结果表明,菊花经硫磺熏蒸后,入肠吸收成分种类减少,含量降低。并且发现,在小肠吸收过程中,黄酮苷类会转化成黄酮苷元类成分,但是黄酮苷元类成分并不能按比例全部吸收。3.3体内代谢结果本章对硫磺熏蒸与热风血浆中的10种化合物的药代动力学参数进行比较,发现热风血浆中10种化合物的血药浓度均比硫磺熏蒸的高(除高剂量下咖啡酸),且均具有较明显的双峰现象,而硫磺熏蒸血浆中10种成分双峰现象不明显。硫磺熏蒸与热风亳菊血浆中各化合物的消除半衰期(HLλz)和体内滞留时间(MRTlast)相差较大。所以硫磺熏蒸对亳菊入血成分在体内的消除速度和滞留时间影响较大。3.4抗氧化应激研究结果本章研究结果发现,热风菊花水提物可以更好地抑制HUVEC脂滴内吞。另外,测定细胞的活性氧族(ROS)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性结果表明,热风菊花水提物能够有效的抑制ox-LDL引起的HUVEC中ROS、MDA水平的升高,同时可显著提高SOD活性,且效果均较硫熏菊花水提物强。3.5亳菊干燥工艺结果研究结果表明不同干燥工艺对亳菊的品相、质量与活性均有较大影响。随着热风干燥温度的升高,菊花颜色逐渐发生褐变,黄酮苷类及酚酸类成分含量降低,黄酮苷元类成分含量升高,抗氧化活性也明显降低。微波干燥得到的亳菊样品外观都很鲜艳,无明显差异,影响其化学成分和抗氧化活性的因素主要有微波电流大小及履带的转速,但是微波干燥易发生微波泄露且经济耗费大。4结论4.1硫磺熏蒸对菊花化学成分产生影响主要原因是SO2气体对酶促褐变酶的影响造成的,以及硫磺本身带有的性质导致药材中SO2残留显著增加。4.2硫磺熏蒸后,菊花体内外吸收代谢均受到明显影响,且对胃肠道有刺激作用。4.3硫磺熏蒸后,菊花的抗氧化应激作用减弱。4.4硫磺熏蒸对亳菊化学成分、吸收及代谢均有显著影响,故本文综合化学成分、干燥时间、外观和实际生产成本,优选出亳菊的最佳干燥工艺为低于60?C热风干燥,并且此工艺可在生产中推广使用。
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