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目的
1.探讨BALB/C小鼠骨髓瘤微波消融联合瘤体内注射树突状细胞(dentriticcell DC)对小鼠抗肿瘤免疫反应的影响;
2.评价BALB/C小鼠骨髓瘤微波消融联合瘤体内注射DC对肿瘤的治疗效果。为DC疫苗的研制和临床抗肿瘤治疗提供新的实验依据。
方法
1.选4只健康BALB/C小鼠,无菌取出长骨骨髓和脾细胞,分离提取单核细胞,体外诱导培养成为树突状细胞,光镜观察DC形态变化,流式细胞仪鉴定DC细胞膜表面标志物(33D1、CD83),留取待用。
2.取BALB/C小鼠24只,随机分为三组,每组8只,第一组为空白荷瘤对照组,第二组为单纯肿瘤微波消融治疗组,第三组为肿瘤微波消融联合瘤体内DC注射组。
3.将BALB/C小鼠2×105骨髓瘤细胞(1×106/ml,0.2ml/只)注射入BALB/C小鼠背部皮下,约10天后肿瘤直径达到10mm时,对2、3组小鼠肿瘤行微波消融治疗,将留用的DC多点注射在第3组小鼠瘤体内(注射器贯穿肿瘤进针,远端肿瘤边缘、肿瘤中心、近端肿瘤边缘注射DC细胞,浓度1×106/ml,0.2ml/只),注射DC 24小时后注射小鼠TNF-α于DC注射相同部位,剂量10ng/只。4.微波治疗前一天及治疗后3、5、7 d游标卡尺测量实体瘤长、宽、高,并以公式(肿瘤体积=6/π×长×宽×高)计算其体积;第7天处死实验动物,摘眼球取外周血1ml,流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8);肿瘤组织切片HE染色,光镜观察肿瘤生长情况。
结论
1.微波消融联合肿瘤局部注射DC并予以小鼠TNF-α刺激DC成熟能产生有效的抗肿瘤细胞免疫反应。
2.微波消融联合肿瘤局部注射DC可以有效控制肿瘤生长。对DC肿瘤疫苗的研制和临床治疗肿瘤具有指导意义。