黄花菜中秋水仙碱的提取及其抑菌性能研究

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秋水仙碱(colchicine)亦被称为有机胺类生物碱,由于能特异的与细胞微管蛋白亚单位(tubulin)结合,阻止微管蛋白的形成,致使纺锤体结构无法形成,抑制细胞分裂,在医学上可用作抗癌药物,在农业上可用于多倍体植株的培育。然而,秋水仙碱类生物碱在自然界中的分布很窄,其含量低、来源有限,已不能满足社会的需求。本文首先研究了超临界流体萃取、超声波辅助提取及振荡浸渍提取三种方法提取黄花菜中秋水仙碱的工艺参数,在此基础上研究了应用柱层析从动态、静态角度纯化粗提物的条件参数,最后粗略地研究了秋水仙碱对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌生长的抑制性能。1.黄花菜中秋水仙碱的提取首先研究了超临界二氧化碳流体萃取黄花菜中的秋水仙碱的条件参数,探讨了萃取压力、温度、时间、提携剂种类与体积及浓度等因素对提取量的影响。结果表明,在选定的实验参数范围内,各因素的影响顺序为:萃取温度对结果影响最显著,夹带剂体积、萃取时间与压力依次位列其后,最佳的条件组合是:15MPa、1.5h、41℃、200mL。其次研究了超声波辅助提取黄花菜中的秋水仙碱的条件参数,探讨了温度、时间、溶剂种类与浓度、料液比等因素对提取量的影响。结果表明,在选定的实验参数范围内,各因素的影响顺序为:料液比对结果影响最显著,提取时间、提取温度与原料粒度依次位列其后,最佳的条件组合是:1.5h、25℃、100目、1:35。最后研究了振荡浸渍提取黄花菜中的秋水仙碱的条件参数,探讨了温度、时间、振荡速度、溶剂种类与浓度等因素对提取量的影响。结果表明,在选定的实验参数范围内,各因素的影响顺序为:溶剂浓度对结果影响最显著,料液比、振荡速度与提取时间依次位列其后,最佳的条件组合是:8h、150r/min、85%、1:30。2.粗提物的纯化本文研究了柱层析从动态、静态角度纯化粗提物的条件参数。首先考查了所选树脂饱和吸附量的大小,其次探讨了洗脱液浓度、体积及pH值对静态吸附与解析效果的影响,最后探讨了树脂组合方式及洗脱液浓度、体积、pH值、流速等对动态吸附与解析效果的影响。结果表明,树脂饱和吸附量大小顺序为:AB-8>X-5>NKA-9;树脂不同组合方式纯化能力的强弱顺序为:分步、混匀、串联;最佳静态解吸条件组合是:解吸时间为4.0h、pH值为10.0±0.02、浓度为95%的乙醇50mL,最佳动态解吸条件组合是:pH值为6.87±0.02、浓度为85%的乙醇70mL、流速是1.6mL/min;最优纯化条件组合可使提取物纯度达91.20%。3.秋水仙碱分子量的测定及抑菌性能研究本文对实验所得秋水仙碱的分子量进行了测定,并研究了秋水仙碱对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌生长的抑制性能。首先在培养基中加入不同浓度的秋水仙碱,通过测定细菌生长曲线探究了秋水仙碱的抑菌性能;在此基础上再以划线及涂布法对秋水仙碱的抑菌性能作了进一步验证。结果表明,实验所得秋水仙碱的分子量为400.2;秋水仙碱对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的生长均有抑制作用,且随浓度升高抑制作用增强;且在同浓度下对大肠杆菌生长的抑制作用更明显。
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