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目的： 本课题选取人宫颈癌 Hela 细胞作为研究对象，利用放射线照射，探讨双PI3K/mTOR抑制剂NVPBEZ235对宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用。 方法： 1.四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测 NVPBEZ235 体外抗肿瘤作用 体外培养Hela细胞，采用MTT法检测NVPBEZ235的增殖抑制作用，并计算出半数抑制浓度IC50(nM)）。以不同剂量（0、6.25、12.5、25、100nmol/L）的NVPBEZ235分别于不同时间（24 h、48 h、72 h）处理Hela细胞，测定其抑制肿瘤细胞增殖的时效和量效关系。2.克隆形成法检测 NVPBEZ235 放射增敏作用 应用NVPBEZ235处理细胞24h，联合射线（irradiation,IR）作用，采用克隆形成试验检测NVPBEZ235及NVPBEZ235联合IR作用对肿瘤细胞集落形成能力的影响。3.流式细胞仪检测肿瘤细胞周期 应用NVPBEZ235处理细胞24h，联合IR作用，流式细胞术分析对肿瘤细胞周期分布的影响。4.Hoechst 染色检测肿瘤细胞核染色 NVPBEZ235及NVPBEZ235联合IR作用下在光学显微镜观察对Hela细胞核的影响。5.Annexin-FITC 细胞凋亡试剂盒检测肿瘤细胞凋亡 应用流式细胞术采用Annexin-FITC细胞凋亡试剂盒检测NVPBEZ235及NVPBEZ235联合IR作用后诱导肿瘤细胞凋亡的时期和比例。 结果： 1.体外抗肿瘤实验表明，NVPBEZ235对Hela细胞具有明显的抑制活性，呈时间-剂量依赖性。MTT 结果显示，随着时间的延长和药物浓度的增高，细胞的存活率逐渐降低。根据计算得出 IC50 值分别为：24 h：328.8 nmol/L，48 h：225 nmol/L，72 h：122.48 nmol/L。2.克隆实验显示NVPBEZ235对Hela细胞具有较强的集落形成抑制能力；不同处理组细胞克隆形成的克隆数进行分析比较得出，NVPBEZ235 分别联合 IR 照射处理与单纯IR组相比，Hela 细胞的存活分数显著下降，表明药物对宫颈癌 Hela 细胞有放射增敏作用。3.流式细胞仪检测NVPBEZ235 及放射线（6Gy）单独作用对 G0/G1 期数目影响不大，但联合作用可使 G2/M 期细胞比例明显增高，细胞被阻滞在对射线敏感的 G2/M 期。与单药或照射组比较，二者联用对 G2 / M 期的阻滞作用更加显著。4.Hoechst染色各处理组，可以在倒置荧光显微镜下观察到凋亡细胞出现，观察到发亮发白的凋亡细胞核。5. 采用 Annexin-FITC 细胞凋亡试剂盒检测干预后诱导肿瘤细胞凋亡的时期和比例，与 NVPBEZ235 和 IR(6Gy) 共处理的宫颈癌 Hela 细胞凋亡明显多于单药与 IR 组(P<0.05)。各组Hela 细胞的凋亡率明显多于对照组。Hela 细胞凋亡率的单药组和联合组分别为 48.85%、52.51%，明显高于对照组(21.5%)和 IR 组(46.99%)。 结论： 1.NVPBEZ235 在体外能够抑制人宫颈癌 Hela 细胞的生长增殖，抑制作用表现出时间剂量依赖性。2.NVPBEZ235 、IR 联合作用细胞，在体外可以使细胞周期阻滞于 G2/M 期，二者具有协同作用。3.NVPBEZ235 联合 IR 组放射增敏作用较 IR 组要高。4.NVPBEZ235、IR 可以使细胞凋亡，二者联合作用促进Hela细胞凋亡。