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目的:建立同时测定丙戊酸钠（Sodium Valproate,VPA）及其代谢产物2-ene-VPA（2-Propyl-2-pentenoic Acid,2-ene-VPA）和4-ene-VPA（2-Propyl-4-pente-noic Acid,4-ene-VPA）血药浓度的反相高效液相色谱法（Reversed phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC）,分析服药剂量与VPA、2-ene-VPA和4-ene-VPA血药浓度的关系,探讨性别对VPA、2-ene-VPA和4-eneVPA血药浓度的影响,细胞色素P4502C9（CYP2C9）基因多态性与VPA和4-ene-VPA血药浓度的关系,为丙戊酸钠个体化用药提供参考。方法:选择确诊为癫痫且单药服用丙戊酸钠治疗,无肝功能异常和器质性病变的18岁以下癫痫患者,每天定时服用VPA,血药浓度达稳态后,于清晨服药前抽取患者静脉血2 mL进行以下检测:（1）建立反相高效液相色谱法测定丙戊酸钠与2-ene-VPA和4-ene-VPA的血药浓度。血浆以正辛酸为内标,用硫酸酸化,正己烷提取,氮气挥干样品,乙腈复溶,2,4’-二溴苯乙酮作为衍生化试剂,三乙胺催化,在80℃水浴衍生化30 min;色谱柱:ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,紫外检测波长:258 nm,流动相:乙腈-甲醇-水=59:13:28,流速:1.0 mL·min-1,柱温:35℃;（2）用血液直接PCR方法检测74名患儿CYP2C9基因型;（3）分析VPA服药剂量、性别对VPA、2-ene-VPA及4-ene-VPA血药浓度的影响,CYP2C9基因型与VPA及4-ene-VPA血药浓度的关系;（4）统计学方法:计量资料用表示,运用SPSS 20.0统计软件对VPA服药剂量与VPA、2-ene-VPA及4-ene-VPA血药浓度之间的关系,VPA血药浓度与2-ene-VPA和4-ene-VPA血药浓度之间的关系进行相关性分析,采用独立样本t检验探讨性别对VPA、2-ene-VPA和4-ene-VPA血药浓度的影响,CYP2C9基因型与VPA和4-ene-VPA血药浓度的关系。结果:（1）VPA、2-ene-VPA及4-ene-VPA的RP-HPLC分析方法:VPA、2-ene-VPA、4-ene-VPA和内标正辛酸的保留时间分别为11.6 min、9.4 min、8.6 min和12.4 min;VPA、2-ene-VPA和4-ene-VPA与内标正辛酸的峰面积比与浓度呈良好的线性关系,VPA浓度范围为5.00200.00μg·mL-1,yvpa=0.2169xvpa+0.6286（r=0.9995,n=5）;2-ene-vpa浓度范围为0.5016.00μg·ml-1,y2-ene-vpa=0.3206x2-ene-vpa+0.1041（r=0.9991,n=5）;4-ene-vpa浓度范围为0.5016.00μg·ml-1,y4-ene-vpa=0.4357x4-ene-vpa+0.3531（r=0.9996,n=5）,最低定量限分别为5.00μg·ml-1,0.50μg·ml-1和0.50μg·ml-1（s/n>5）;vpa、2-ene-vpa和4-ene-vpa低、中、高3个浓度血浆质控样品的平均提取回收率分别为vpa74.60%、81.44%、81.97%,2-ene-vpa76.82%、83.26%、78.57%,4-ene-vpa79.46%、83.26%、79.36%,日内rsd<5%,日间rsd<5%,稳定性rsd<5%;（2）cyp2c9目的基因条带大小为315bp,野生型cyp2c9*1和突变型cyp2c9*3等位基因频率分别为95.25%和4.75%,野生型纯合子（cyp2c9*1/*1）和突变型杂合子（cyp2c9*1/*3）基因型频率分别为90.5%和9.5%;（3）纳入017岁的癫痫患儿74例,平均年龄（6.5±4.1）岁,vpa平均给药剂量（18.34±5.86）mg·kg-1;（4）vpa给药剂量与vpa、2-ene-vpa和4-ene-vpa血药浓度之间的关系:vpa给药剂量与vpa血药浓度相关性具有统计学意义（p<0.05,r=0.330）,与2-ene-vpa、4-ene-vpa血药浓度相关性无统计学意义（p=0.175,r=0.160）,（p=0.131,r=0.186）;（5）性别对vpa、2-ene-vpa和4-ene-vpa血药浓度的影响:（1）服用vpa的74例癫痫患儿中,男性与女性vpa给药剂量分别为（18.01±5.58）mg·kg-1和（19.02±6.18）mg·kg-1,二组间给药剂量差异不具有统计学意义（p=0.505）,（2）癫痫患儿vpa、2-ene-vpa、4-ene-vpa血药浓度分别为男性（70.15±24.79）μg·ml-1、（3.56±1.51）μg·ml-1、（1.07±0.40）μg·ml-1,女性（76.23±23.61）μg·ml-1、（3.39±1.70）μg·ml-1、（1.08±0.39）μg·ml-1,男女之间血药浓度相比差异不具有统计学意义（p=0.346）,（p=0.682）,（p=0.970）;（6）基因型对vpa和4-ene-vpa血药浓度的影响:（1）a组（cyp2c9*1/*1）和b组（cyp2c9*1/*3）给药剂量分别为（17.89±5.66）mg·kg-1和（22.12±5.15）mg·kg-1,两组给药剂量差异不具有统计学意义（p=0.062）;（2）a组和b组vpa血药浓度分别为（70.94±25.28）μg·ml-1和（79.93±12.94）μg·ml-1,两组血药浓度差异不具有统计学意义（p=0.359）;（3）4-ene-vpa血药浓度分别为（1.11±0.39）μg·ml-1和（0.76±0.29）μg·ml-1,两组血药浓度差异具有统计学意义（p=0.025）。结论:（1）本课题建立了同时测定vpa及其代谢产物2-ene-vpa和4-ene-vpa血药浓度的rp-hplc分析方法,可用于临床上癫痫患者服用vpa后测定血药浓度,以分析药物的疗效和不良反应。（2）cyp2c9*1/*3表型使cyp2c9的酶活性降低,影响丙戊酸钠的代谢,是影响疗效和不良反应的一个重要因素,为临床个体化用药提供参考。