论文部分内容阅读
目的: 通过研究miR-491-5p与DAT基因mRNA3’UTR VNTR相互作用,探讨其调控DAT表达对药物成瘾性的影响。 方法: 用生物信息学方法预测可能与DAT基因mRNA3’UTR VNTR序列有相互作用的miRNA;采用双荧光素酶报告基因技术验证miR-491-5p与DAT基因mRNA3’UTR VNTR序列的相互作用;采用逆转录实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术观察miR-491-5p对DAT基因mRNA和蛋白质表达水平的影响;并用ELISA技术检测miR-491-5p对DAT介导的神经细胞多巴胺转运功能的影响。 结果: 生物信息学方法预测到miR-491-5p与DAT VNTR有相互作用;双荧光素酶报告基因系统检测证实了miR-491-5p与DAT VNTR有相互作用;逆转录实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术显示,miR-491-5p能够显著抑制SK-N-SH细胞DAT基因mRNA和蛋白质的表达水平;ELISA结果表明,miR-491-5p能够抑制DAT介导的神经细胞多巴胺转运功能。 结论: miR-491-5p通过与DAT mRNA3’UTR VNTR结合,抑制DAT的表达,从而影响DAT介导的多巴胺在突触前膜释放后的再摄取,放大神经递质的效应,影响药物成瘾的发生过程。