论文部分内容阅读
烟草是我国重要的经济作物,由烟草疫霉侵染烟草引起的黑胫病是一种分布广泛、危害严重的毁灭性土传病害。目前该病害的防治措施主要有种植抗病品种、化学防治、农业防治和生物防治等,其中拮抗放线菌在烟草病害生物防治上的应用是研究热点之一。为了明确洛阳烟区烟株根围土壤中拮抗放线菌的种类,探究土壤放线菌的多样性及群落结构,试验采用改良平板对峙法与菌丝生长速率法测定了筛选菌株及其发酵液对烟草疫霉的拮抗作用;通过形态学观察、生理生化测定及16S rDNA序列分析鉴定了优势拮抗放线菌的种类;采用Illumina MiSeq测序技术探究了烟株根围土壤中放线菌的多样性及群落结构。主要研究结果如下。(1)从烟株根围土壤分离的放线菌稀释涂布平板上共挑出放线菌单菌落496个,进一步分离纯化获得形态或颜色不同的放线菌单菌落227个。(2)15株拮抗放线菌的发酵液对烟草疫霉具有较强的拮抗作用,其中8个菌株的发酵液对烟草疫霉菌丝生长的抑制率达100%。(3)从18株拮抗放线菌中鉴定得到12个种,分别为温和链霉菌(Streptomyces moderatus)、教酒色链霉菌(S.chartreusis)、玫瑰黄链霉菌(S.roseoflavus)、娄彻链霉菌(S.rochei)、弗氏链霉菌(S.fradiae)、金黄回旋链霉(S.aureoverticillatus)、高贵链霉菌(S.nobilis)、鲁萨链霉菌(S.lucensis)、珊瑚链霉菌(S.coralus)、生黑孢链霉菌(S.melanosporofaciens)、吸水链霉菌(S.hygroscopicus)和阿姆利则链霉菌(S.amritsarensis),均属于放线菌门(Actinobacteria)、放线菌纲(Actinobacteria)、链霉菌目(Streptomycetales)、链霉菌科(Streptomycetaceae)、链霉菌属(Streptomyces),其中温和链霉菌与教酒色链霉菌对植物病原真菌有较强的抑制作用在国内外为首次报道。(4)获得放线菌OTUs 588个,物种分析表明,放线菌隶属于1门5纲15目21科28属,其中,放线菌纲为土壤放线菌中的优势种群。(5)洛阳烟区烟株根围土壤放线菌种群较为丰富,施用生物有机肥,可以提高烟株根围土壤放线菌的丰富度。本研究采用传统的形态学、生理生化特征分析及分子生物学相结合的方法鉴定了洛阳地区烟株根围土壤中抗烟草疫霉放线菌的种类,为进一步研究优势拮抗放线菌在烟草病害生物防治中的开发利用及其防病机理奠定基础;采用Illumina MiSeq测序技术对烟株根围土壤中的放线菌进行检测,通过OTUs基础分析并结合分类学分析了烟株根围土壤中放线菌的多样性及群落结构,为进一步探讨放线菌在土壤微生物群落中的地位及筛选目的放线菌提供一定的理论参考。