目的:观察丙泊酚对人脐静脉内皮细胞的组织蛋白酶K(CathepsinK,CatK)和Notch1蛋白表达的影响,探讨丙泊酚对CatK和Notch1蛋白表达的意义。方法:选用人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为正常组(CON)和丙泊酚组(PF),当细胞长满80%左右时进行给药,以20μM丙泊酚浓度处理24h。收集上清采用ELISA法检测VEGF含量、收集部分细胞用Western Blot检测Cat K、c-Notch1和t-Notch1表达,若观察到CatK表达具有显著性变化,则进一步进行蛋白组学实验。采用TMT定量蛋白组学方法鉴定差异表达蛋白。应用Mascot软件对二级质谱图信息进行定性定量计算。对差异蛋白进行GO注释、亚基分类、GO富集分析、KEGG富集分析和结构域富集分析。结果:(1)丙泊酚介导人脐静脉内皮细胞中CatK表达增强和Notch1活化。(2)丙泊酚对人脐静脉内皮细胞的VEGF分泌无明显变化。(3)经过TmT定量蛋白组学实验,共筛选出115个差异表达蛋白,其中上调蛋白71个,下调蛋白44个。(4)差异表达蛋白GO分析结果,上调蛋白主要参与的生物过程,包括细胞、单生物及代谢过程等16种过程,细胞成分包括细胞、细胞器及细胞膜等9种成分,分子功能包括结合、催化及信号转导活性等7个功能。下调蛋白主要参与生物过程,包括细胞、代谢及单生物过程等13种过程,细胞成分包括细胞、细胞器、膜封闭腔等7种成分,分子功能包括结合、催化活性、核算结合转路因子活性等5种功能。(5)差异表达蛋白亚细胞结构定位分类结果显示,上调蛋白定位于质膜、细胞外及线粒体等9个部位,下调蛋白定位于细胞核、细胞质及线粒体等7个部位。(6)差异表达蛋白KEGG通路富集分析结果显示上调蛋白富集在ECM受体相互作用、代谢途径及脂肪酸代谢等13种通路,下调蛋白富集在DNA复制、细胞周期及嘧啶代谢等4个通路。(7)差异表达蛋白结构域富集分析结果显示上调蛋白富集在四跨膜蛋白和EC2、CD81抗原和大细胞外环及整合素等6种结构域,下调蛋白富集在MCM寡核苷酸、MCM-N末端及MCM等8种结构域。结论:丙泊酚可刺激人脐静脉内皮细胞表达组织蛋白酶K,并活化Notch1,其过程不依赖VEGF分泌,ECM受体相互作用和细胞增殖受到抑制可能是组织蛋白酶K介导的血管新生机制之一,需进一步深入研究。