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鱼类是高度适应水中生活的低等水生脊椎动物,在形态结构、生理生化、新陈代谢等方面对水环境的适应和其他陆生脊椎动物有显著的区别。许多差异在比较解剖学、比较生理学和比较生物化学等方面都有详细的研究和阐述,然而涉及鱼类血液凝固机理方面的研究鲜有报道。为了检测鱼类的血液被稀释后凝固加快的酶促反应机理,本试验参照哺乳动物的凝血反应的基本过程,对鱼的凝血反应进行了分步检测。主要检测鱼类的内在凝血途径中的凝血反应:(1)根据不同的凝血时相所需的时间来比较分析,筛选出起作用的或者有影响关键步骤,进行初步定性分析;(2)为了证实鲤鱼的这一凝血现象是否在其他淡水鱼中也会发生,选择了鲫鱼Carassius auratus (Linnaeus)和鲶鱼Silurus asotus Linnaeus进行试验比较;(3)为了探讨凝血反应的进化问题,选择了两栖类的蟾蜍Bufo bufo gar-garizans Canto、次水生爬行类的中华鳖Pelodiscus sinensis和哺乳动物家兔Oryctolagus cuniculus做为试验动物,初步探讨不同变温动物(poikilothermal animal)类群(水生,两栖,陆生)之间异同,为进一步研究凝血机理的进化奠定基础。本试验采用血液凝固法,主要检测了几种动物的被稀释的全血或无细胞血浆的血凝特性及其各自的凝血酶时间和活化部分凝血酶时间及检测这几种动物无细胞血浆中的磷脂有效性,最后研究了中华鳖被稀释的全血和无细胞血浆的凝固时间和其活化部分凝血酶时间、凝血酶时间和凝血酶原时间特性。结果表明:(1)鲤鱼、鲫鱼、鲶鱼和蟾蜍的全血被水稀释前后的凝血时间(79.64 s、21.59s~42.79 s、p<0.01;80.95 s、22.39s~63.85 s、p<0.01;139.18 s、51.27s~75.68 s、p<0.01和94.11 s、72.63 s~75.69 s、p<0.05)在统计学上差异是极显著或显著的。(2)鲤鱼、鲫鱼、鲶鱼和蟾蜍的无细胞血浆被水稀释前后的凝血时间(108.55 s、31.62 s~84.29 s;113.10 s、48.88 s~83.87 s;183.50 s、61.89 s~121.18 s和137.52 s、78.27 s~114.00 s)在统计学上差异极显著(p<0.01)。(3)鲤鱼、鲫鱼、鲶鱼和蟾蜍的无细胞血浆被水稀释前后的凝血酶时间(10.75 s、8.60 s~11.96 s;10.25 s、7.83 s~10.86 s;7.91 s、4.09 s~6.22 s和8.52 s、5.14 s~6.11 s)之间差异不显著(p>0.05)。(4)鲤鱼和鲫鱼无细胞血浆被水稀释前后的活化部分凝血活酶时间(12.80 s、13.80 s~14.03 s;14.69 s、13.68 s~16.60 s)之间差异不显著(p>0.05)。(5)家兔、鲤鱼、鲫鱼和鲶鱼磷脂加热前后活化部分凝血活酶时间(57.40 s、59.04 s;12.79 s、12.80 s;13.06 s、14.69 s和18.21s、18.30 s)之间差异不显著(p>0.05);鲤鱼、鲫鱼和鲶鱼加热的血浆和正常血浆复钙时间比较,试验结果在统计学上差异极显著(p<0.01);加热前后的鲤鱼、鲫鱼和鲶鱼的无细胞血浆分别与家兔不同稀释倍数的PPP的混合,试验组和对照组的混合血浆凝固时间差异极显著的(p<0.01)。(6)中华鳖的全血被水稀释前后的凝血时间(174.23 s、127.65 s~211.35 s)在统计学上差异是不显著的(p>0.05);中华鳖的无细胞血浆被水稀释后的发生了凝固,凝血时间范围为166.12 s~250 s;中华鳖的无细胞血浆被水稀释前后的活化部分凝血活酶时间(147.75 s、101.78s~128.35 s)在统计学上差异是极显著的(p<0.01);中华鳖的无细胞血浆被水稀释前后的凝血酶原时间(50.61 s、46.15 s~58.52 s)在统计学上差异是极显著的(p>0.05);中华鳖的无细胞血浆被水稀释前后的凝血酶时间(9.20 s、7.97 s~9.54 s)在统计学上差异是不显著的(p>0.05)。结论:(1)鲤鱼、鲫鱼、鲶鱼和蟾蜍的全血稀释后内源性途径凝固时间缩短;(2)鲤鱼、鲫鱼、鲶鱼和蟾蜍的无细胞血浆发生了凝固,且其被水稀释后凝固时间缩短;(3)鲤鱼、鲫鱼、鲶鱼、蟾蜍和中华鳖的无细胞血浆稀释后内源性途径凝固时间的终末相不受影响;(4)鲤鱼和鲫鱼无细胞血浆稀释后的的活化部分凝血酶时间没有影响,但其血凝时间显著短于全血或无细胞血浆的凝固时间(p<0.01);(5)磷脂在80℃加热20 min.后,其凝血功能并未发生变化;(6)鲤鱼、鲫鱼和鲶鱼的无细胞血浆中没有游离的磷脂,即他们的血浆在不形成FⅨa-FⅧa-PF3-Ca2+复合物和FⅩa-FⅤa-Ca2+-PF3复合物的情况下也能凝固。