论文部分内容阅读
目的:探讨九节龙皂苷Ⅰ(Ardipusilloside I,ADSⅠ)对多种人脑胶质瘤细胞系自噬活性的增强作用。方法:培养人脑胶质瘤U87MG、U251MG、U373MG、SHG-44MG细胞系,随机分为二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)对照组和ADSⅠ治疗组。采用甲基噻唑基四唑法(Methyl thiagolyl tetragolium,MTT)检测不同剂量ADSⅠ对四种典型人胶质瘤增殖的影响;透射电镜(Transmission electron microscopy,TEM)观察四种典型人脑胶质瘤细胞超微结构的形态学变化;免疫细胞化学法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC-3的表达变化;Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC-3的表达水,流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测ADSⅠ对U373MG细胞周期和凋亡的作用;自噬抑制剂氯喹(Chloroquine,CQ)对ADSⅠ介导的U373MG细胞自噬活性的作用。结果:MTT法检测显示:ADSⅠ可明显抑制四种典型人脑胶质瘤细胞的生长,呈现时间-剂量依赖性。TEM可以观察到细胞形态学上的典型自噬小体特征,包括成核、自噬体形成等。免疫细胞化学结果显示:ADSⅠ作用于四种典型人脑胶质瘤细胞24 h后,自噬相关蛋白Beclin-1、LC-3均在胞浆中高表达,并随ADSⅠ药物浓度的增加,自噬相关蛋白Beclin-1、LC-3阳性细胞率也随之增高。Western-blot结果提示:ADSⅠ能增强四种典型人脑胶质瘤细胞中的自噬相关蛋白Beclin-1、LC-3的表达水平,并且随ADSⅠ药物浓度增加,表达增高;FCM结果表明,3.8 mg/L的ADSⅠ显著阻滞U373MG细胞周期的G2/M相,低高浓度ADSⅠ显著提高U373MG的凋亡和坏死细胞术;自噬抑制实验表明,CQ可以显著减弱ADSⅠ对U373MG细胞存活率的抑制作用。结论:ADSⅠ能够抑制典型胶质瘤U87MG、U251MG、U373MG、SHG-44MG细胞活性,诱导Beclin-1和LC-3的表达水平升高,引发自噬性细胞死亡。这些结果为ADSⅠ的抗胶质瘤活性研究提供体外实验依据。