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目的:癫痫是一种脑部疾患,其特点是持续存在能产生癫痫发作的脑部持久性改变,并出现相应的神经生物学、认知、心理学以及社会学等方面的后果。癫痫患者除癫痫发作外,常伴有注意力分散、学习记忆能力减退等认知功能受损的表现,其中学习记忆能力减退是癫痫患者认知障碍中最常见的症状。约有30%癫痫患者有认知功能损害,20%～25%的患者有明显障碍。严重者可影响工作、学习和生活质量,并给家庭和社会带来沉重负担。认知功能障碍已成为癫痫防治的重点之一。通过腹腔注射戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)建立更加类似临床发作的慢性癫痫大鼠模型来观察慢性点燃癫痫大鼠学习记忆能力的改变,并运用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Western Blot以及免疫组织化学等方法观察其海马神经颗粒素(neurogranin ,Ng)的表达变化,探讨Ng在癫痫大鼠学习记忆障碍中的作用,为进一步研究癫痫认知功能障碍的机制奠定基础。方法:采用戊四氮腹腔注射慢性点燃癫痫(chronic epileptic,CEP)模型,选取经Y迷宫筛选合格的清洁级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠100只,实验起始质量(200±20)g, 12 h光亮/黑暗条件、22℃～25℃环境温度,分笼喂养。随机分为两组:慢性癫痫发作组(chronic epileptic group,CEP组)60只,正常对照组(normal control group,NC组)40只。CEP组大鼠每日晨8:00～9:00腹腔注射PTZ 35mg/kg,连续30天,每天注射完毕后观察1小时。NC组大鼠给予同等剂量、同等次数的生理盐水。依据Racine分级标准将大鼠行为分为6级。0级:无任何反应;Ⅰ级:胡须动、面肌抽动;Ⅱ级:点头、咀嚼或湿狗样抖动(wet dog shakes,WDS);Ⅲ级:一侧前肢抬起、阵挛;Ⅳ级:站立伴有双侧前肢阵挛;Ⅴ级:跌倒、全身强直阵挛性发作。完全点燃的标准是获得连续3次Ⅳ级或以上的运动惊厥。实验第31天起选取完全点燃的CEP组和NC组大鼠各16只分别行Morris水迷宫和Y迷宫检测,测定大鼠学习记忆能力,记录大鼠在Morris水迷宫中的逃避潜伏期、穿越平台次数及在平台象限的时间,记录在Y迷宫中的错误反应次数及全天总反应时间,然后各组大鼠均取8只运用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法和Western Blot方法分别测定大鼠海马Ng mRNA和蛋白的水平变化,用免疫组织化学方法观察Ng在海马CA1区、CA3区的表达情况。结果:1动物模型制备CEP组大鼠在连续注射第6～10天起开始出现凝视、点头、反复洗脸动作、面部及头部抽搐等,以后发作症状逐日加重,于给药第18～24天全部出现全身肌阵挛、双前肢抬起,最终发生全身强直-阵挛性发作,伴有跌倒、翻滚及流涎,达到RacineⅣ～Ⅴ级的点燃标准,继续给药至30天。NC组动物均无癫痫发作表现。2 Morris水迷宫及Y迷宫检测结果Morris水迷宫定位航行实验:CEP组大鼠第1天逃避潜伏期与NC组比较差异无统计学意义(P >0.05),第2天高于NC组(P <0.05),第3天仍高于NC组(P <0.01);空间探索试验:CEP组大鼠120s内穿越平台区域的次数明显低于NC组(P <0.01),在平台所在象限的游泳时间与NC组比较差异无统计学意义(P >0.05)。Y迷宫检测结果:CEP组与NC组比较大鼠的错误反应次数增多(P <0.05),但全天总反应时间,两组之间比较差异无统计学意义(P >0.05)。3大鼠海马Ng mRNA和蛋白的表达CEP组大鼠海马Ng mRNA相对吸光度值0.53±0.07,明显低于NC组0.74±0.04(P <0.01);CEP组大鼠海马Ng蛋白的表达0.61±0.17低于NC组0.91±0.23( P <0.05)。4 Ng在海马CA1区、CA3区的表达情况Ng的免疫反应物呈棕褐色,主要位于海马CA1区、CA3区的锥体细胞层神经元的胞浆中。在CA1区CEP组Ng的免疫反应强度较NC组弱( P <0.05),在CA3区两组比较差异无统计学意义。结论:1戊四氮慢性点燃癫痫大鼠学习记忆能力受损,主要表现为Morris水迷宫中逃避潜伏期延长,平台穿越次数减少以及Y迷宫中错误反应次数增加。2与对照组比较,戊四氮慢性点燃癫痫组大鼠海马神经颗粒素mRNA转录水平下降,蛋白表达减少,在海马CA1区免疫反应减弱。海马Ng表达减少可能参与了癫痫所致学习记忆障碍。