第一部分、Livin及PTEN蛋白在视网膜母细胞瘤中的表达及其与视网膜母细胞瘤临床病理特征的关系　　 目的:研究视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)组织中Livin和PTEN蛋白的表达，探讨视网膜母细胞瘤中Livin和PTEN蛋白的表达及其与视网膜母细胞瘤临床病理特征的关系。　　 方法:选取2000年1月至2010年12月在我院行手术治疗，并经病理证实为视网膜母细胞瘤的43例患者的视网膜组织切片，用Max-visionTM快捷免疫组化法联合检测Livin和PTEN在正常视网膜和视网膜母细胞瘤中的表达及其两者的相关性，并分析其与视网膜母细胞瘤临床病理特征之间的关系。　　 结果:　　 1.视网膜母细胞瘤组中Livin、PTEN阳性表达分别为27例(62.79％)、20例(46.51％)，对照组分别为7例(20.59％)、31例(91.18％);Livin在视网膜母细胞瘤组织中的表达明显高于正常视网膜组织(x2=3.714，p＜0.05)，PTEN蛋白在视网膜母细胞瘤中表达与正常对照组比较明显降低（x2=16.937，p＜0.05）。　　 2.Livin表达与视网膜母细胞瘤的分化程度有关，PTEN表达与视网膜母细胞瘤的分化程度及临床分期有关(p均＜0.05)。　　 3.视网膜母细胞瘤标本中，27例Livin阳性表达的标本中，PTEN阳性表达8例，阴性表达19例;16例Livin阴性表达的标本中，PTEN阳性表达12例，阴性表达4例;二者呈负相关(r=-0.440，p=0.003)。　　 结论:视网膜母细胞瘤组织中Livin的激活与PTEN的失活或缺失之间存在相互协同作用，共同参与了视网膜母细胞瘤的发生发展，提示视网膜母细胞瘤的形成是多基因、多因素共同作用的结果，联合检测Livin和PTEN可为视网膜母细胞瘤的诊断和治疗提供必要的理论依据。　　 第二部分、拓扑替康对视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响　　 目的:在体外观察拓扑替康(topotecan，TPT)是否对人视网膜母细胞瘤Hxo-rb44细胞具有诱导凋亡和抑制增殖的作用，为探讨拓扑替康应用于视网膜母细胞瘤的临床化疗提供理论基础。　　 方法:常规培养人视网膜母细胞瘤Hxo-rb44细胞株，加入不同浓度的拓扑替康，采用MTT法观察不同浓度的拓扑替康在不同时间点对Hxo-rb44细胞增殖的影响，并计算其IC50值。应用流式细胞仪(flowcytometer, FCM)检测不同浓度的拓扑替康作用不同时间后对人视网膜母细胞瘤Hxo-rb44细胞株细胞凋亡的影响。　　 结果:各浓度拓扑替康均能明显抑制人视网膜母细胞瘤Hxo-rb44细胞的增殖，且拓扑替康对Hxo-rb44细胞增殖的抑制率随浓度增高和时间延长而增加，且表现为明显的剂量-效应依赖性和时间-效应依赖性。流式细胞术检测结果提示，拓扑替康可明显诱导人视网膜母细胞瘤Hxo-rb44细胞凋亡的发生，并且与药物浓度以及作用时间呈依赖关系。　　 结论:拓扑替康对人视网膜母细胞瘤细胞株Hxo-rb44细胞具有诱导凋亡和抑制增殖的作用。　　 第三部分、拓扑替康对视网膜母细胞瘤中Livin和PTEN表达的影响　　 目的:在体外观察拓扑替康是否具有影响Livin及PTEN表达的作用，探讨视网膜母细胞瘤治疗的机理，为今后拓扑替康应用于视网膜母细胞瘤的治疗提供有力的理论基础。　　 方法:对人视网膜母细胞瘤细胞株Hxo-rb44进行培养传代，用Westernblot（蛋白质免疫印迹）法检测凋亡过程中Livin和PTEN蛋白表达的动态变化。　　 结果:应用Western blot法检测观察到，随着拓扑替康作用时间的延长Livin蛋白表达水平显著下降，PTEN蛋白表达水平显著上升。　　 结论:拓扑替康可以有效诱导人视网膜母细胞瘤细胞株Hxo-rb44细胞发生细胞凋亡，其作用机制与抑制Livin和上调PTEN蛋白的表达有关，拓扑替康有望应用于人视网膜母细胞瘤的化疗之中。