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本研究根据2006~2007年山东省畜禽疾病爆发报道和山东省畜禽养殖分布,在山东省范围内进行大肠杆菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌、鸡伤寒沙门氏菌和新城疫病毒的病料采集,采集地点分布在济南、潍坊、烟台、临沂、青岛等9个地区17个规模牧场及兽医院。
研究对细菌库采用“病料收集—分离培养—生物学特性试验—细菌纯化真空冻干”的技术路线,分别以动物临床症状、镜检观察、分离培养特性、细菌生化鉴定来判定和描述细菌特性;对病毒库采用“病料收集—病毒分离培养—生物学特性试验——分子生物学鉴定—病毒纯化真空冻干”的技术路线,分别以HA-HI试验、动物临床症状、MDT和ICPI测定初步判定和描述NDV的特性,以RT-PCR分子生物学试验进行最终鉴定,来获得菌种资源信息。
本研究共分离鉴定了大肠杆菌80株,平台资源号为1511C0006SL000061~140;金黄色葡萄球菌30株,平台资源号为1511C0006SL000141~170;猪链球菌50株,平台资源号为1511C0006SL000171~190和1511C0006SL000271~300;鸡伤寒沙门氏菌103株,平台资源号为1511C0006SL000318~420;特殊菌株17株,平台资源号为1511C0006SL000301~317。对分离到细菌资源进行生化试验,均符合各自的生化特性。
本研究共分离到60株NDV,6.6%的新城疫分离株为新城瘦弱毒型,35%为中等毒力型,58.3%为强毒型,都可以特异性扩增出F基因片段。山东省NDV病毒库的强毒株与国内外NDV序列的HN基因同源性在80%~97%之间,中毒株的同源性在82%~98%之间,弱毒株的同源性在82%~98%之间;山东省NDV病毒库21株毒株之间核苷酸同源性在92%~99.9%之间,氨基酸同源性在95%~100%之间。同源关系进化树表明强毒株与标准株LaSota距离较近,强、中弱毒株在进化树上明显分为不同类别。菌种资源收集合理并具有代表性,资源平台能够充分刻画山东省NDV特性。
对分离的各种资源进行标准化整理整合,分别完成《资源描述表》和《共性描述规范表》,并进行菌种的冻干保存送交国家兽医微生物菌种保藏管理中心国家兽医微生物标准菌种保藏库保存,将各个相关的数据录入中国兽医微生物资源信息网的数据库,并实现与E-平台的衔接。