论文部分内容阅读
目的：探讨蓝光照射诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞凋亡的分子机制，研究在此过程中Ca2+-PKC信号通路所起的作用。
方法：分别用不同浓度的蛋白激酶C(protein kinase C)激动剂PMA和抑制剂Calphostin C预处理体外培养的第四代人RPE细胞；用Western bloting法检测PKC蛋白表达，确定PMA与Calphostin C影响PKC活性的最适宜浓度。将体外培养的第四代人RPE细胞随机分为2组：A组：蓝光光照组，用(2000±500)Lux蓝光照射6h，终止培养24h；B组：无光照组。用非放射性核素法测定无光照组与蓝光光照组PKC活性变化。将体外培养的第四代人RPE细胞随机分为5个干预组：A组：无光照组：B组：单纯蓝光光照组；C组：蓝光+硝苯地平组；D组：蓝光+CalphostinC组；E组：蓝光+PMA组；用Fluo-3 AM标记人RPE细胞，用激光共聚焦显微镜(LSCM)测定各组细胞内Ca2+荧光强度。
结果：(1)PMA组：100nmol/L组和200nmol/L组PKC活性均高于其它各组，差异有统计学意义(P=0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000)，100nmol/L组与200nmol/L组相比PKC活性无明显变化，差异无统计学意义(P=0.072)；Calphostin C组：100nmol/L组和200nmol/L组PKC活性均低于其它各组，差异有统计学意义(P=0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000)，100nmol/L组与200nmol/L组相比PKC活性无明显变化，差异无统计学意义(P=0.385)。(2)蓝光光照组PKC活性高于无光照组，差异有统计学意义(T=8.136，P=0.015)。(3)蓝光光照组、蓝光+硝苯地平组、蓝光+Calphostin C组和蓝光+PMA组细胞内Ca2+荧光强度值均高于无光照组，差异有统计学意义(P=0.000，0.000，0.000，0.000)；蓝光+硝苯地平组、蓝光+Calphostin C组细胞内Ca2+荧光强度值均低于蓝光光照组，差异有统计学意义(P=0.000，0.000)；蓝光+硝苯地平组细胞内Ca2+荧光强度值低于蓝光+Calphostin C组，差异有统计学意义(P=0.000)；蓝光+Calphostin C组细胞内Ca2+荧光强度值低于蓝光+PMA组，差异有统计学意义(P=0.000)；蓝光光照组细胞内Ca2+荧光强度值低于蓝光+PMA组，差异有统计学意义(P=0.000)。
结论：(1)PMA和Calphostin C影响PKC活性的最适宜浓度均为100nmol/L；(2)蓝光照射后人RPE细胞内PKC活性增高；(3)蓝光照射后人RPE细胞内钙离子浓度增高，胞内增高的钙离子可能来源于钙通道及Ca2+-PKC信号通路；钙通道抑制剂硝苯地平和PKC抑制剂Calphostin C均能使蓝光照射后的人RPE细胞内钙离子浓度降低，且硝苯地平作用更强；PKC激动剂PMA的作用则相反；(4)Ca2+-PKC信号通路可能参与并调节蓝光照射诱导体外培养的人RPE细胞凋亡过程。