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乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一。雌激素(estrogen)对于维持正常乳腺组织的发育和功能至关重要，雌激素作用的发挥需要通过与雌激素受体α和β(ERα和ERβ)的结合，而ERα和ERβ二者又都可以以很高的活性与各种组蛋白结合，而组蛋白的乙酰化是影响细胞各种生理功能的最典型的一种方式，它依赖于组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs)两类酶。在乳腺细胞中，ER正是通过募集如HATs和HDACs等转录共调节因子，利用它们呈现的各种酶活性来调控基因的表达。
目的本文意在通过构建可在真核细胞中表达的重组质粒pcDNA3-HA-hdac1，研究组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)和雌激素受体ERα和ERβ在体外的相互结合作用，以及HDAC1对ERα和ERβ蛋白水平的影响规律，从而在一定角度揭示乳腺细胞的增殖、分化和癌变的过程，为更好地寻找治疗癌症的药物靶标打下基础。
方法①从癌细胞中用TRIzol一步法提取总RNA产物；
②用Promega反转录试剂盒进行反转录合成cDNA；
③利用PCR技术扩增出hdac1基因完整编码区序列；
④通过DNA重组技术构建含hdac1片段的真核表达载体pcDNA3-HA-hdac1；
⑤利用体外转录和翻译偶联的方法，成功地用35S标记并翻译了ERα和ERβ。将GST-HDAC1融合蛋白或GST纯化蛋白分别与35S标记的ERα或ERβ混合后进行GST沉淀(pull-down)实验，来观察HDAC1在体外是否能特异结合ERα或ERβ；
⑥将重组质粒pcDNA3-HA-hdac1分别和ERα质粒(pcDNA3-ERα)或ERβ质粒(pcDNA3-ERβ)共转293T细胞，观察HDAC1对ERα和ERβ蛋白水平的影响。
结果①重组质粒pcDNA3-HA-hdac1构建成功并经酶切鉴定得到证实；
②重组质粒pcDNA3-HA-hdac1在真核细胞内表达并经Western印迹分析证实；
③GST沉淀(pull-down)实验结果表明，GST-HDAC1均能与ERα和ERβ结合，而阴性对照GST不能结合，说明HDAC1能特异结合ERα和ERβ；
④将重组质粒pcDNA3-HA-hdac1分别和pcDNA3-ERα或pcDNA3-ERβ质粒共转293T细胞，观察到HDAC1对ERα和ERβ蛋白水平的影响不同：HDAC1可特异地使得ERα蛋白水平降低，而不影响ERβ的蛋白水平。
结论①构建的含hdac1片段的真核表达载体pcDNA3-HA-hdac1在真核细胞中能表达HDAC1蛋白；
②HDAC1对ER的作用具有亚型特异性，ERα和ERβ的蛋白水平可能受不同类型的组蛋白去乙酰化酶(HDACs)的调控。
③HDAC1可能作为调节ER的另外一种机制，在乳腺癌的发生发展过程中发挥重要作用。