【摘 要】
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目的为了寻找适宜的眼眶骨组织工程的生物活性支架及增强种子细胞的成骨分化能力,本实验研究了新型纳米复合支架纳米羟基磷灰石复合氧化石墨烯（nano-hydroxyapatite-graphene oxide,nHA-GO）和氧化石墨烯（graphene oxide,GO）复合支架对人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived stem cells,h ASCs）成骨分化的影响,以及微
【基金项目】
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国家自然科学基金（81470663）； 国家高技术研究发展计划（863 计划）（2015AA020311）； 国家自然科学基金 （81070737,31300810）； 上海交大“医工交叉”；
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目的为了寻找适宜的眼眶骨组织工程的生物活性支架及增强种子细胞的成骨分化能力,本实验研究了新型纳米复合支架纳米羟基磷灰石复合氧化石墨烯（nano-hydroxyapatite-graphene oxide,nHA-GO）和氧化石墨烯（graphene oxide,GO）复合支架对人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived stem cells,h ASCs）成骨分化的影响,以及微小RNA miR-424对人脂肪间充质干细胞成骨分化的影响及其调控机制,有望提高组织工程骨在修复眼眶骨缺损中应用前景。材料与方法1.通过细胞增殖、粘附试验、q PCR、蛋白电泳及碱性磷酸酶和茜素红染色等评估nHA-GO/GO复合支架对h ASCs增殖及成骨分化的影响;通过h ASCs复合nHA-GO/GO支架裸鼠皮下异位成骨实验,HE染色,Von Kossa染色以及免疫组织化学观察其对体内新骨形成的影响。2.构建miR-424过表达和抑制慢病毒载体,在加入BMP-2重组蛋白及传统成骨诱导液两种诱导条件下,通过q PCR、蛋白电泳、碱性磷酸酶和茜素红染色等测定miR-424对h ASCs成骨分化的调控作用。结果1.nHA-GO复合支架不抑制h ASCs的粘附、增殖,有良好的生物相容性,能在增殖培养和成骨诱导培养下均促进h ASCs的成骨分化。体内异位成骨实验显示,nHA-GO复合支架复合h ASCs能在体内促进新骨生成。2.过表达miR-424能抑制h ASCs的成骨分化,而抑制miR-424则能促进h ASCs的成骨分化,miR-424可能是通过其靶基因Smad5发挥作用的。结论1.nHA-GO复合支架在体外促进脂肪间充质干细胞的成骨分化,在体内能促进新骨生成,可作为一种新的纳米支架材料,在眼眶骨组织工程中有良好的潜在应用前景。2.miR-424参加人脂肪间充质干细胞成骨分化的调控,并可通过抑制Smad5的表达来抑制h ASCs的成骨分化,为基因增强技术增强h ASCs的成骨分化提供了一个新的潜在作用靶点。
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