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原发性肝细胞肝癌(简称肝癌)是最常见的恶性肿瘤之一,其侵袭转移与治疗后高复发是患者死亡的主要原因。因此,探索肝癌侵袭转移与复发的发生机制,寻求有效的抗肝癌转移与复发治疗措施,对改善肝癌患者的预后具有重要意义。肿瘤转移是一个多步骤、多因素参与的极其复杂的多阶梯过程,这一过程受到肿瘤本身和宿主环境种种因素的影响,虽然不同种类肿瘤的转移特性有所不同,但转移过程中关键步骤基本相同,包括原发癌生长、肿瘤血管形成、瘤细胞脱落并侵入基质、进入脉管系统、癌栓形成、继发组织器官定位生长、转移癌继续扩散等基本过程。热休克蛋白是人体发展和发育过程中一种重要的保护性应激蛋白。小热休克蛋白作为热休克蛋白家族中重要成员,可作为分子伴侣抵抗蛋白聚集及变性。研究表明小热休克蛋白家族中的alpha B-crystallin在一些恶性肿瘤中呈过度表达。但目前alpha B-crystallin在肝癌侵袭和转移中的作用及机制报道较少。本研究分析不同转移潜能肝癌细胞株中alpha B-crystallin表达,通过转染与干扰技术改变肝癌细胞株中alpha B-crystallin表达,探讨其与肝癌细胞侵袭与转移的关系；在临床肝癌标本中检测alpha B-crystallin及其活性成分磷酸化alpha B-crystallin (p-alpha B-crystallin)表达,分析其与肝癌组织中的表达及其与肝癌患者预后的相关性；最后分析不同表达alpha B-crystallin肝癌细胞株在缺氧应激下基因表达改变,探讨alpha B-crystallin在肝癌侵袭和转移中的作用的分子机制。第一部分小热休克蛋白alpha B-crystallin在肝癌细胞株中的表达及与侵袭与转移的关系目的：研究小热休克蛋白alpha B-crystallin在肝细胞癌细胞株中的表达及其与侵袭与转移的关系。方法：荧光定量PCR和Western blot检测不同转移潜能肝癌细胞株中alpha B-crystallin表达；分别将慢病毒包装pAcGFP1-C1-alphaB-crystallin cDNA质粒与U6-vshRNA-CMV-RFP转染入肝癌细胞株Hep3B和HCCLM3细胞,筛选稳定细胞株并验证；用划痕实验和Transwell研究alpha B-crystallin表达改变对肝癌细胞移动和侵袭能力的影响。结果：不同转移潜能的肝癌细胞株表达不同水平的alpha B-crystallin;成功构建转染慢病毒介导pAcGFP1-C1-alphaB-crystallin cDNA高表达alpha B-crystallin的Hep3B细胞和转染慢病毒介导U6-vshRNA-CMV-RFP低表达alpha B-crystallin的HCCLM3细胞；肝癌细胞增殖受alpha B-crystallin表达水平影响；上调肝癌细胞中alpha B-crystallin表达可显著增强细胞移动、侵袭能力,下调肝癌细胞中alpha B-crystallin表达则显著降低细胞移动、侵袭能力。结论：肝癌细胞株中alpha B-crystallin中表达与肝癌细胞的侵袭潜能密切相关。第二部分小热休克蛋白alpha B-crystallin和磷酸化alpha B-crystallin在临床肝癌中的表达及与患者预后关系分析目的：研究alpha B-crystallin及磷酸化alpha B-crystallin (p-alpha B-crystallin)在肝癌组织中表达,探讨其与临床病理特征及患者生存的关系。方法：应用逆转录PCR (RT-PCR)、荧光定量PCR和Western blot检测alpha B-crystallin在肝癌、相应癌旁中的表达,并比较两组间alpha B-crystallin的表达差异。组织芯片结合免疫组织化学染色检测403例肝癌组织中alpha B-crystalline及p-alpha B-crystallin蛋白表达,分析两者与肝癌临床病理特征及预后的关系。结果：qRT-PCR显示肝癌、相对表达量为0.0595±0.028,明显高于相应癌旁(0.0231±0.013,p<0.05),肝癌早期复发组为0.0749±0.021,明显高于未复发组(0.0370±0.023,p<0.05)；RT-PCR和Western blot也显示类似的结果；免疫组织化学染色显示alpha B-crystallin及p-alpha B-crystallin染色定位于肿瘤细胞的胞浆,alpha B-crystalin蛋白的过表达与肿瘤包膜(p=0.011)、血管侵犯(p=0.004)相关,而与其他参数无关；p-alpha B-crystallin蛋白表达与肿瘤大小(p=0.007)、肿瘤包膜(p=0.010)、血管侵犯(p=0.001)、肿瘤组织分化(p=0.033)有关,而与其他参数无关；多因素分析显示alpha B-crystallin及p-alpha B-crystallin是影响肝癌患者生存的独立预后指标。结论：肝癌组织中alpha B-crystallin及p-alpha B-crystallin表达与肝癌的恶性表型相关,是影响肝癌患者生存的独立预后指标。第三部分alpha B-crystallin促进肝癌细胞侵袭及转移的分子机制初探目的：探讨alpha B-crystallin在肝癌侵袭和转移中作用的分子机制。方法：对HCCLM3-Mock, HCCLM3-vshHspB5, Hep3B, HEp3B-HspB5四种细胞株在缺氧应激下基因芯片扫描分析。结果：alpha B-crystallin过度表达应对缺氧刺激显著影响促血管生成因子如VEGF和MMP的表达。结论：alpha B-crystallin过度表达可能通过改变促血管生成因子表达影响肝癌的侵袭及转移。