PEA3对FAAP基因的调控

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Ets家族能编码一大类转录因子。编码的所有转录因子都有一个高度保守的含85个氨基酸的DNA结合结构域,被命名为ETS结构域。它能特异性的识别并结合嘌呤丰富的DNA中心靶序列5ˊ-GGA(A/T)-3ˊ。根据转录因子的转录激活结构域和ETS结构域将所有的Ets家族成员分成了四大类,每类包含几个亚家族,每个亚家族又包含不同的成员。PEA3亚家族就属于Ets家族,它包含三个家族成员:ER81/ETV1、PEA3/ETV4、ERM/ETV5。PEA3亚家族的三个成员ETV1、ETV4、ETV5在Ets结构域的同源性高达95%,在转录激活域的同源性高达85%。粘着斑相关蛋白(FAAP,focal adhesion associated protein)是由小鼠D10Wsu52e基因编码的。此蛋白约55KD,含505个氨基酸。FAAP存在于许多物种中且高度保守。在细菌和人中已鉴定出它的同源物分别为RtcB和HSPC117。已有研究证明,RtcB是一种独特的依赖GTP的RNA连接酶和DNA连接酶。而HSPC117是人类tRNA连接酶复合体的必需亚单位。通过生物信息学分析发现FAAP启动子上含有8个PEA3结合位点。克隆了PEA3家族的三个成员ER81/ETV1、PEA3/ETV4、ERM/ETV5,以及3个荧光素酶报告基因pGL2-492,pGL2-336,pGL2-276。pGL2-492含有全部的8个结合位点,pGL2-336含有4个结合位点,pGL2-276只含有1个结合位点。同时将PEA3结合位点的核心序列AGGA突变成ATTT,克隆突变体pGL2-m492、pGL2-m336、pGL2-m276。通过双荧光素酶实验发现ETV1、ETV4、ETV5都对pGL2-1317具有活性影响,且ETV4对pGL2-492、pGL2-336和pGL2-276也具有活性影响。最后,通过凝胶阻滞实验也证实了PEA3与小鼠FAAP启动子具有一定的结合作用。总之,我们的研究表明PEA3能通过结合FAAP启动子结合元件调节FAAP的表达。
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