【摘 要】
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目的:通过研究川崎病（Kawasaki disease,KD）患者与健康儿童尿液外泌体mi RNA的表达水平差异,来筛选出川崎病急性发病期特异存在的mi RNA,进而评价尿液外泌体mi RNA作为川崎病潜在诊断标志物的价值,为川崎病的早期诊断提供无创、快捷、灵敏的诊断方法。方法:根据美国心脏病学会（American heart association,AHA）2017年制定的KD诊疗指南[1],纳
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（编号:81870364）; 深圳市三名工程项目（编号:SZSM 20162057）
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目的:通过研究川崎病（Kawasaki disease,KD）患者与健康儿童尿液外泌体mi RNA的表达水平差异,来筛选出川崎病急性发病期特异存在的mi RNA,进而评价尿液外泌体mi RNA作为川崎病潜在诊断标志物的价值,为川崎病的早期诊断提供无创、快捷、灵敏的诊断方法。方法:根据美国心脏病学会（American heart association,AHA）2017年制定的KD诊疗指南[1],纳入2020年6月至2020年12月期间在深圳市儿童医院确诊的30例静脉注射丙种球蛋白（Intravenous immunoglobulin,IVIG）治疗前的川崎病急性期KD患者作为实验组,并招募30名健康志愿者作为对照组。应用超高速离心法分别对5组川崎病患儿混合尿液（n=6/组）和5组对照混合尿液（n=6/组）中的外泌体进行提取,对提取出的外泌体进行电镜及标记蛋白的质量鉴定;使用Trizol法提取质量合格的外泌体RNA;运用高通量测序分析,检测出两组exosome中mi RNA的表达谱情况,从而筛选出差异表达最大的差异mi RNA（Differentially expressed mi RNA）;并对DEPs进行基因功能注释分析（Gene Ontology,GO）、京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）通路分析,最后使用qt-PCR方法对筛选出的mi RNA进行验证。结果:（1）我们根据Fold change＞=2且P value＜0.05标准在两组检测出的RNA中共筛选出28种差异mi RNA,其中6种显著上调,10种显著下调。这为后续寻找KD的新型生物标志物提供基础。（2）通过GO通路富集分析表明,差异mi RNA主要参与细胞增殖、生物调节、代谢过程、对刺激应答反应、氨基酸转运过程等是mi RNA参与的主要生物学过程,涉及的分子功能及细胞功能则主要包括结合、催化活性、转运蛋白活性、分子转换器活性和细胞、细胞膜、细胞器膜和突触膜的合成等。（3）KEGG通路分析表明差异mi RNA与细胞生长和死亡,转运和分解代谢,细胞内信号传导,心血管系统疾病,肿瘤,感染性疾病,免疫疾病等。（4）通过Illumina SBS方法对KD急性期患儿及健康对照儿童进行尿液外泌体mi RNA的高通量测序,共筛选出28种差异mi RNA,其中6种显著上调,10种显著下调,包括显著上调的mi R-26-5p、mi R-508-5p、mi R-508-3p、mi R-1271-5p、mi R-155-5p、mi R-143-3p、mi R-139-5p和显著下调的mi R-217-5p、mi R-125a-3p、mi R-193b-5p作为川崎病潜在生物标志物。结论:本课题通过对比KD和健康儿童尿液,筛选出显著差异的10种目标mi RNA,包括显著上调的mi R-26-5p、mi R-508-5p、mi R-508-3p、mi R-1271-5p、mi R-155-5p、mi R-143-3p、mi R-139-5p和显著下调的mi R-217-5p、mi R-125a-3p、mi R-193b-5p作为差异基因。通过对这10种差异mi RNA进行分析发现KD与机体炎症反应和动脉内皮细胞的损伤在分子水平上有着密切的联系,为后续诊断及治疗KD提供新的思路及方向。
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