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目的应用转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)刺激大鼠胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs),建立慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)胰腺纤维化(pancreatic fibrosis,PF)体外细胞模型,检测氧化苦参碱对TGF-β1刺激的PSCs中TGF-β1/Smad3/Gli1通路相关因子、PSCs活化标志物即α肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和纤维化标志物即纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)、I型胶原蛋白(type I-collagen,Co L-I)相关因子表达的影响。进一步应用sh Smad3和sh Gli1的RNA干扰质粒对PSC细胞进行转染,检测转染该质粒后,对TGF-β1诱导的胰腺纤维化体外细胞模型中Smad3和(或)Gli1及胰腺纤维化标志物的影响。再应用高表达Smad3(EGFP-Smad3)和高表达Gli1(EGFP-Gli1)质粒转染PSCs,检测转染该质粒后氧化苦参碱(Oxymatrine,OM)对Smad3和(或)Gli1及纤维化标志物的影响。研究OM通过抑制TGF-β1/Smad3/Gli1信号通路发挥抗胰腺纤维化作用的分子机制,为OM治疗CP提供新的实验依据。方法1.利用Western Blot技术检测不同浓度TGF-β1对LTC-14细胞中TGF-β1/Smad3/Gli1信号通路关键因子:Smad3、Gli1和α-SMA表达的影响。2.TGF-β1刺激转染sh Smad3干扰质粒的LTC-14细胞,利用Western Blot和实时定量PCR技术检测TGF-β1/Smad3/Gli1通路关键分子:Smad3、Gli1和α-SMA表达的变化;利用ELISA方法检测纤维化标志物FN和Co L-I的表达变化。3.TGF-β1刺激转染sh Gli1干扰质粒的LTC-14细胞,利用Western Blot和实时定量PCR技术检测Gli1和α-SMA表达的变化;利用ELISA方法检测纤维化标志物FN和Co L-I的表达变化。4.OM干预TGF-β1刺激的LTC-14细胞,利用Western Blot和实时定量PCR技术检测TGF-β1/Smad3/Gli1信号通路关键分子:Smad3、Gli1和α-SMA的变化;利用ELISA技术检测纤维化标志物FN和Co L-I的表达变化。5.OM干预转染EGFP-Smad3高表达质粒的LTC-14细胞,利用Western Blot技术检测TGF-β1/Smad3/Gli1信号通路关键分子:Smad3、Gli1和纤维化标志物α-SMA的表达变化;利用ELISA方法检测纤维化标志物FN和Co L-I的表达变化。6.OM干预转染EGFP-Gli1高表达质粒的LTC-14细胞,利用Western Blot技术检测Gli1和α-SMA表达变化;利用ELISA方法检测纤维化标志物FN和Co L-I的表达变化。结果1.通过不同浓度TGF-β1诱导LTC-14细胞,检测发现该细胞中Smad3、Gli1和α-SMA蛋白水平显著升高,尤其在10ng/m L达到峰值。2.sh Smad3干扰质粒可显著降低TGF-β1诱导的LTC-14细胞中Smad3、Gli1和α-SMA的m RNA及蛋白表达水平,以及培养基上清中FN和Co L-I的分泌水平。3.sh Gli1干扰质粒可显著降低TGF-β1诱导的LTC-14细胞中Smad3、Gli1和α-SMA的m RNA及蛋白表达水平,以及培养基上清中FN和Co L-I的分泌水平。4.OM可显著降低TGF-β1诱导的LTC-14细胞中Smad3、Gli1和α-SMA的m RNA及蛋白表达水平,以及培养基上清中FN和Co L-I的分泌水平。5.OM可显著降低转染EGFP-Smad3高表达质粒的LTC-14细胞中Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达,以及培养基上清中FN和Co L-I的分泌水平。6.OM可显著降低转染EGFP-Gli1高表达质粒的LTC-14细胞中Gli1和α-SMA的蛋白表达,以及培养基上清中FN和Co L-I的分泌水平。结论1.胰腺星状细胞TGF-β1/Smad3/Gli1信号通路参与了慢性胰腺炎胰腺纤维化的发生。2.OM通过抑制胰腺星状细胞TGF-β1/Smad3/Gli1信号通路发挥抗胰腺纤维化作用。