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目的:通过实验,验证四逆散及其不同配伍干预实验性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的效用,探讨四逆散不同配伍干预实验性UC的机制。材料与方法:1四逆散不同配伍干预实验性UC的效用研究将实验大鼠分为14组,采用免疫法造模,以实验大鼠一般状况、结肠组织大体情况、结肠组织病理变化,胸腺指数、脾脏指数和结肠组织NF-κB作为观察与检测指标,用Q-PCR检测核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在组织的基因表达,用免疫组化法检测NF-κB的活性。2四逆散干预实验性UC的机制研究在“四逆散不同配伍干预实验性UC的效用研究”的基础上,将实验动物分为5组,采用免疫法造模,以实验大鼠结肠组织大体情况、结肠组织病理变化和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)作为观察与检测指标,用Q-PCR检测上述细胞因子在组织的基因表达,用ELISA法检测细胞因子活性。结果:1四逆散不同配伍干预实验性UC的效用研究1.1四逆散不同配伍对实验性UC大鼠一般状况的影响造模第l4天,大鼠多出现食量减少、拱背、聚堆、懒动;第21天,均出现饮食明显减少,稀便、毛发不泽,拱背、聚堆、懒动。各给药组造模大鼠上述症状有不同程度改善。正常组大鼠饮食、大小便、活动正常。给药前后正常组实验大鼠体重平均增长54%,而其他各组实验大鼠体重平均增长范围在32%～38%。1.2四逆散不同配伍对实验性UC大鼠结肠组织损伤的影响肉眼观察,模型组大鼠病变结肠肠壁增厚,肠黏膜糜烂,黏膜表面弥漫性充血、水肿,可见出血点和溃疡。各药物治疗组大鼠结肠黏膜表现不同程度充血、水肿,可见轻度糜烂和溃疡。结肠组织损伤程度评分结果显示,造模组大鼠的结肠损伤程度明显高于正常组(P<0.05)。与模型组比较,各药组大鼠的结肠损伤程度显著降低。光镜下观察,模型组黏膜表面可见溃疡形成,个别深达肌层,炎症反应较重,有充血、糜烂,中性粒细胞浸润,黏膜上皮部分缺失,局部固有层腺体减少,黏膜下层血管增生,黏膜肌层不明显。其余各组均有不同程度的病变。结肠病理组织学评分结果显示,造模组大鼠的结肠病理组织学评分结果明显高于正常组(P<0.05)。与模型组比较,芍甘组和枳甘组无明显差异,其余各组显著降低(P<0.05)。1.3四逆散不同配伍对实验性UC大鼠胸腺指数与脾脏指数的影响造模后,模型组和柴芍组大鼠胸腺指数显著低于正常组,以柴芍组降低最为显著(P<0.05),其余各组与正常组无显著性差异;与模型组比较,对照组、四逆散组、柴芍甘组、芍枳甘组、柴芍组、柴甘组、芍甘组和枳甘组大鼠胸腺指数均存在显著差异。造模后大鼠脾脏指数均显著高于正常组(P<0.05);与模型组相比,对照组、四逆散组和柴枳甘组的脾脏指数显著增高(P<0.05)。1.4四逆散不同配伍对实验性UC大鼠结肠组织NF-κB基因表达及活性的影响模型组实验大鼠结肠黏膜NF-κB mRNA表达水平明显高于正常组(P<0.05);各药物组实验大鼠结肠黏膜NF-κB mRNA表达水平与模型组比较均存在显著性差异,其中,枳甘组显著高于模型组(P<0.05)。模型组实验大鼠结肠黏膜NF-κB活性明显高于正常组(P<0.05);四逆散组与正常组比较,无显著差异;除柴甘组和枳甘组外,其余各药物组均显著低于模型组(P<0.05);与四逆散组比较,各药物组显著高于四逆散组(P<0.05)。2四逆散干预实验性UC的机制研究2.1四逆散对实验性UC大鼠IL-1β的影响模型组实验大鼠结肠黏膜IL-1βmRNA表达水平明显高于正常组(P<0.05);四逆散组、柴芍枳组和柴芍组与正常组比较无显著性差异;与模型组比较,四逆散组、柴芍枳组和柴芍组均显著降低(P<0.05)。模型组和四逆散组实验大鼠血清IL-1β含量明显高于正常组(P<0.05),而柴芍枳组和柴芍组与正常组比较无统计学意义;四逆散组与模型组比较无显著性差异;柴芍枳组和柴芍组显著低于模型组和四逆散组(P<0.05)。2.2四逆散对实验性UC大鼠TNF-α的影响模型组实验大鼠结肠黏膜TNF-αm RNA表达水平明显高于正常组(P<0.05);四逆散组、柴芍枳组和柴芍组与正常组比较无显著性差异;与模型组比较,四逆散组、柴芍枳组和柴芍组均显著降低(P<0.05);柴芍枳组明显高于四逆散组(P<0.05),而柴芍组明显低于四逆散组(P<0.05)。与正常组比较,模型组、四逆散组、柴芍枳组和柴芍组实验大鼠血清TNF-α的含量均明显高于正常组;与模型组比较,四逆散组、柴芍枳组和柴芍组显著降低(P<0.05)。2.3四逆散对实验性UC大鼠IL-4的影响模型组实验大鼠结肠黏膜IL-4 mRNA表达水平明显低于正常组(P<0.05);四逆散组和柴芍枳组与正常组比较无显著性差异,而柴芍组则显著高于正常组(P<0.05);与模型组比较,四逆散组、柴芍枳组和柴芍组均显著升高(P<0.05);柴芍枳组和柴芍组均显著高于四逆散组(P<0.05)。与正常组比较,模型组、四逆散组、柴芍枳组和柴芍组实验大鼠血清IL-4的含量均明显降低(P<0.05);给药后,柴芍枳组与模型组比较无显著性差异,而四逆散组和柴芍组大鼠明显高于模型组(P<0.05),其中,柴芍组明显低于四逆散组(P<0.05)。2.4四逆散对实验性UC大鼠IL-10的影响模型组实验大鼠结肠黏膜IL-10 mRNA表达水平明显低于正常组(P<0.05);四逆散组、柴芍枳组和柴芍组与正常组比较无显著性差异;与模型组比较,四逆散组、柴芍枳组和柴芍组均显著升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组、四逆散组、柴芍枳组和柴芍组实验大鼠血清IL-10的含量均明显降低(P<0.05);给药后,柴芍枳组与模型组比较无显著性差异,而四逆散组和柴芍组大鼠明显高于模型组(P<0.05),柴芍组明显低于四逆散组(P<0.05)。结论:四逆散能够干预实验性UC,其作用可能是通过刺激免疫器官分泌免疫细胞,抑制NF-κB的激活来实现的;四逆散对实验性UC作用以全方作用最为理想。四逆散能够干预实验性UC,其作用机理可能为:①抑制促炎因子IL-1β的移行和TNF-α的分泌,促进抗炎因子IL-4和IL-10的分泌,调节促炎因子和抗炎因子之间的平衡,干预实验性UC;②降低实验性UC大鼠结肠黏膜NF-κB的表达水平,调控UC细胞因子网络。