【摘 要】
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第一部分:淋球菌mtrR调控区突变片段的体外重组和鉴定;目的:临床淋球菌的基因表型存在着较大的差异,不同来源的淋球菌株之间 的可比性小.该实验旨在体外重组一突变DNA片段.用
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第一部分:淋球菌mtrR调控区突变片段的体外重组和鉴定;目的:临床淋球菌的基因表型存在着较大的差异,不同来源的淋球菌株之间 的可比性小.该实验旨在体外重组一突变DNA片段.用其转染临床 淋菌株,产生特异位点——mtrR调控区突变的转染株.结论:该实验采用基因剪接技术(SOEing)通过DNA片段的重叠延伸,在 体外直接进行重组并扩增大量的突变片段.该实验方法简单易操作而 且突变率可达100﹪.用PCR反应扩增突变产物可为后续实验提供充 足的转染用DNA片段.第二部分:淋球菌mtrR基因调控区删除突变与淋球菌耐药关系的研究;目的:Mtr外排系统可介导淋球菌对多种疏水性抗菌剂产生耐药.而MtrR可 下调mtrCDE基因的转录水平.该试验试图分析淋球菌的mtrR基因调 控区删除突变、MtrCDE基因转录水平及多药耐药三者之间的关系.讨论:该试验所设计的突变不仅破坏了位于mtrR基因调控子中的13 bp反向 重复序列的完整性,而且改变了mtrR转录启动区的结构.将突变片段 EF转染至临床淋菌株,可观察到转染株的mtrCDE转录水平上调并且 对多种脂溶性抗菌剂(HAs)耐药.提示转染株mtrR基因调控区9 bp 片段的删除可阻断mtrR基因的转录和MtrR蛋白的表达,从而诱导淋 球菌耐药.
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