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益生菌通常是一种或多种活的微生物,足够数量的益生菌对宿主本身是有益的。如今,益生菌被广泛应用于水产养殖业,成为其提高产量的重要手段之一。益生菌在鱼类营养,抗病性,免疫调节及其他有益方面已被证实。本研究首先对野生和养殖银鲳(Pampus argenteus)胃、幽门盲囊、前肠、中肠、后肠菌群结构进行了定性对比分析,并对产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶的菌株进行了鉴定。本实验所用养殖银鲳来自东海水产研究所自行繁育的后代,野生银鲳捕自浙江六横岛附近海域。养殖银鲳的平均叉长为10.5±0.5 cm,平均体重为30±5g。野生银鲳的平均叉长为18.0±0.5 cm,平均体重为45±5 g。养殖银鲳在取样解剖前饥饿24 h,野生银鲳暂养24 h,暂养用水取自其生存海域。从2个水体中随机各捞取15尾鱼,每3尾分为一组,解剖前进行拍照并测量其叉长和体重。鱼体解剖在冰盘上进行,取整个肠道并用70%的酒精擦拭整个肠外壁,将其分为胃、幽门盲囊、前肠、中肠、后肠分装于无菌离心管内,将每组鱼的各消化肠段混合后-80℃冻存。肠道菌群经培养后,挑选不同颜色、不同大小、不同形状的菌株进行分离纯化培养,纯化的菌株经16S r DNA基因序列分析,然后对其产酶情况进行筛选。结果发现:野生和养殖种群的消化道菌群结构存在较大差异,且同一种群消化道各部分之间菌群结构也存在较大差异。尽管养殖和野生银鲳均在幽门盲囊中具有最多的可培养细菌菌株,但野生银鲳消化道内主要菌群为嗜冷菌属(Psychrobacter)和Pseudochrobactrum,养殖银鲳消化道主要菌群为不动杆菌属(Acinetobacter)和假单孢菌属(Pseudomonas),两种群共有细菌仅一株,即Psychrobacter piscatorii strain VSD503,但其分别存在于野生与养殖种群银鲳消化道的不同部位。在产酶菌株筛选中发现,野生银鲳消化道内分离到16株产酶菌,其中44%可培养菌能产蛋白酶,56%能产淀粉酶,11%能产脂肪酶,56%能产纤维素酶,部分菌株可产2株以上的消化酶,其中产三种酶以上的菌株有5株,且产酶量丰富。相对于野生银鲳,养殖银鲳消化道内分离到22株产酶菌,主要以产蛋白酶和淀粉酶为主,70%可培养菌可产蛋白酶,21%可产淀粉酶,仅Bacillus thuringiensis strain VITGS可产纤维素酶,无一株菌产脂肪酶,其中只有Bacillus thuringiensis strain VITGS产三种酶但产酶量相对较少。上述研究结果可为后续银鲳人工养殖中潜在益生菌的筛选提供理论依据。其次采用酶学分析法研究了单因子(温度、p H、发酵时间)变化对野生银鲳(Pampus argenteus)消化道内同时分泌蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶中两种以上的菌株产酶活力的影响。在发酵温度对产酶活力的影响实验中,设25℃、28℃、31℃、34℃、37℃和40℃六个温度梯度;在p H对产酶活力的影响实验中,设p H5、6、7、8和9;在发酵时间对产酶活力的影响实验中,设发酵时间为1 d、2 d、3 d、4 d和5 d。将产酶菌按设定的条件进行培养。结果表明,5株产酶菌在温度31~37℃、p H7~8、发酵时间3 d的条件下蛋白酶活力最大;在不同温度和p H条件下5菌株分泌的淀粉酶活力各不相同,但都随发酵时间的延长而酶活力增大,3~5 d达最大值;分泌纤维素酶的4菌株其纤维素酶活力受环境影响总体变化不大,酶活力也最低,发酵温度31~37℃、酸性条件(p H=5)和发酵时间4 d的条件下为最大;2株分泌脂肪酶的菌株在28~31℃、中性(p H=7)、发酵时间1d条件下其脂肪酶活力最大,最大可接近180 U/ml,但2株菌都随发酵时间而显著下降。结果显示,不同产酶菌所分泌的消化酶活力所需的最适条件有很大不同,了解和撑握银鲳肠道中菌群的产酶条件,对其潜在产酶益生菌的开发有着极积的作用。