黄曲霉毒素B1免疫胶乳快速检测技术的研究

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黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)是由寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)和产毒的黄曲霉(A.flavu)产生的一种真菌毒素,有很强的致癌性。许多粮油食品、饲料等都容易被AFB1污染,从而危害人类健康和畜禽生产。所以,几乎所有国家和地区都规定了农产品、食品和饲料中AFB1的最大允许含量,并作为强制性检测标准进行检测。本研究首先以苯乙烯为单体,甲基丙烯酸为改性剂,采用无皂乳液聚合法制备了羧化聚苯乙烯微球(carboxylated polystyrene latex particles,CPLP),然后以牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)免疫BALB/c小鼠,制备抗BSA抗体,研究了CPLP的致敏条件。在此基础上,以黄曲霉毒素B1肟(aflatoxin B1 oxime,AFB1O)与牛血清白蛋白(BSA)的连接物(AFB1O-BSA)致敏CPLP,采用抗AFB1抗血清,建立了AFB1的免疫胶乳快速检测技术。具体的研究内容如下。1 CPLP的制备CPLP是在苯乙烯单体中添加甲基丙烯酸(methacylic acid,MAA)聚合而成的高分子微球。本研究以苯乙烯为单体,甲基丙烯酸作改性剂,采用无皂乳液聚合法,制备出了CPLP,并就改性剂的浓度、聚合时间和聚合温度对胶乳溶液的稳定性的影响、胶乳颗粒大小和苯乙烯单体的转化率进行了研究。结果表明,当改性剂为苯乙烯单体量的10%、75℃聚合12 h时,苯乙烯的转化率最大,达到92%,胶乳颗粒大小为240 nm。在此条件下制备的胶乳溶液,室温放置15 d没有出现沉淀。2胶乳致敏条件的优化以BSA为抗原免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,制备抗BSA腹水抗体。以BSA致敏CPLP,用抗BSA抗体进行方阵滴定,观察凝集反应,研究了致敏条件对致敏效果的影响。结果表明,以0.05 mol/L,pH8.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液(PB)稀释CPLP乳液至1.0%,BSA的终浓度为0.5 mg/mL,37℃致敏30 min时,与1∶160稀释的腹水抗体(效价1∶40,000)发生凝集反应的效果最好。3 AFB1胶乳快速检测试剂的制备在上述研究基础上,制备了AFB1胶乳快速检测试剂,并对试剂的最低检测限和稳定性进行了分析。结果表明,按上述条件制备的AFB1快速检测胶乳试剂,AFB1最低检出限可达5 ng/mL。试剂经适当处理后,4℃放置3个月,质量稳定,而-20℃保存的试剂解冻后不能恢复成均匀乳液。该试剂具有微量、简便、快速和特异性强的特点,可用于AFB1的定性和半定量现场快速检测。
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