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目的：在前期临床研究的基础上开展实验研究：用CRF肾阳虚证大鼠模型,从大鼠一般情况、肾功能、性激素、血液动力学、肾性贫血、肾脏病理等方面,研究穴位敷贴治疗CRF肾阳虚证的作用机理；填补穴位敷贴治疗肾病实验研究的空白。方法：研究对象：体重200±20g成年健康SD雄鼠共84只,随机分7组。空白对照组12只,另72只腺嘌呤灌胃制作慢性肾衰竭肾阳虚证大鼠模型。模型对照组、尿毒清颗粒组、敷贴非穴位组和综合治疗组A、B、C进行实验研究。(1).‘保肾1号巴布剂的制备：保肾1号巴布剂是按由附子、肉桂、细辛、丁香、花椒、穿山龙、生姜等组成按一定比例混合碾粉。经工艺流程制成浸膏后,按一定比例加入事先配制的巴布剂基质(主要成份明胶、甘油、聚丙烯酸钠等)中,并加入0.5%的促渗剂——氮酮、一定比例的乳化剂及防腐剂等,充分溶合,均匀涂布于无纺布上,覆盖聚乙烯薄膜,切成0.5cm×0.5cm的方块,密封包装,阴凉处储存备用。每片巴布剂中的中药含量,以临床成人(按60Kg算)常用量,并按体表面积折算法换算：分别制成高剂量组(每片含中药复方制剂6g),中剂量组(每片含中药复方制剂3g),低剂量组(每片含中药复方制剂1.5g)备用。由湖北省中医院肾病科及药剂科制备。(2).实验方法：造模：体重20 0±20g成年健康SD雄鼠共84只,空白对照组12只,另72只腺嘌呤灌胃制作慢性肾衰竭肾阳虚证大鼠模型。按200mg/kg·d剂量将腺嘌呤制成混悬液1m1,定时给大鼠腺嘌呤灌胃喂药,累计总剂量1.5g／只,造模全过程24d。第1-12d,每日给药1次,第12d以后隔日给药。于第25d剪尾取血,测BUN、Scr、UA、T,证实造模成功。分组：随机分7组,空白对照组、模型对照组、尿毒清颗粒组、敷贴非穴位组和综合治疗组A、B、C进行实验研究。空白对照组(12只)：仅予假敷贴法。模型对照组(12只)：造模+假敷贴法。尿毒清颗粒组(12只)：造模+尿毒清颗粒治疗。敷贴非穴位组(12只)：造模+尿毒清颗粒治疗+敷贴非穴位法(使用低剂量敷贴给药)。综合治疗组(36只)：造模+尿毒清颗粒治疗+穴位敷贴法。综合治疗组A(12只)：使用高剂量敷贴给药。综合治疗组B(12只)：使用中剂量敷贴给药。综合治疗组C(12只)：使用低剂量敷贴给药。上述治疗疗程均为30天。①敷贴法：穴位敷贴法：参考文献取大鼠命门、双肾俞穴(考虑大鼠解剖结构不适合做肢体穴位敷贴,故弃用复溜穴),用10%Na2S将敷贴组大鼠穴位及周边皮肤脱毛3cm×5cm面积,并予保肾1号巴布剂敷贴于穴位处,面积约0.5cm×0.5cm,上面用大块胶布固定。每次敷贴时间均达6～8h,每天敷贴1次,10天一个疗程,三个疗程共计30天。同时分别取高、中、低三个剂量的保肾1号巴布剂敷贴。②假敷贴法：取穴与脱毛的步骤同上,仅使用基质敷贴穴位,面积约0.5cm×0.5cm,上面用大块胶布固定。每次敷贴时间均达6～8h,每天敷贴1次,连续敷贴30天。③敷贴非穴位法：取大鼠腹部皮肤,按上述办法脱毛后,敷贴低剂量保肾1号巴布剂,面积约0.5cm×0.5cm,上面用大块胶布固定。每次敷贴时间均达6～8h,每天敷贴1次,连续敷贴30天。注意：用大块胶布将药物或基质敷贴固定于穴位处；敷贴期间将大鼠分开饲养,防止大鼠互相撕咬导致胶布脱落；每次敷贴均达6h。④尿毒清颗粒治疗：按2g/kg·d剂量尿毒清颗粒制成混悬液lml,定时给慢性肾衰竭肾阳虚证大鼠灌胃喂药,从敷贴日第一天起,共30d。,(3).标本采集及处理：①血浆：造模成功后并敷贴前、末次敷贴后当天,应用股静脉插管取血法测量BUN、Scr、UA、T、RBC、HB、NO。②肾组织：造模成功后并敷贴前、末次敷贴后当天,每组随机取2只,迅速处死摘除左肾,从肾皮质向髓质垂直取材,以戊二醛、多聚甲醛混合液作预固定,其后以1%四氧化饿固定,进一步处理,用光镜观察。光镜：在切片机下进行3um切片,HE染色,观察。(4).观察检测：①日常观察：包括大鼠的饮食、饮水、体重、大小便、皮毛、活动情况、精神状态等情况。重点观察大鼠多尿,多饮,精神萎靡,食少,体重减轻,毛色干枯,耳廓苍白,目色淡红,眯眼,眼睑浮肿,尾巴湿冷,活动度减少,竖毛,蜷缩,多尿,外阴周围潮湿等肾阳虚证表现。②肾功能检测：全自动生化分析仪检测检测血清尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿酸(uric acid,UA)。③血浆睾酮(T)含量：采用酶标免疫法检测。取血1m1,肝素抗凝,离心出血浆,血浆睾酮(T)的测定方法按试剂盒说明书进行操作。④血液学指标：全自动血液分析仪检测血红细胞(RBC)、血红蛋白(HB)。⑤血液动力学：血清一氧化氮(NO)采用硝酸还原酶法。血浆一氧化氮浓度检测：清晨空腹采血,取1mL置肝素抗凝管,1000r/min离心10min,分离后的血浆-70°保存,硝酸还原酶法测定血浆一氧化氮浓度。利用硝酸还原酶特异性将NO3-还原为NO2-,通过显色深浅测定其浓度高低。空白管中加入双蒸水0.1mL,标准管中加入100μmol／L标准应用液0.1mL,测定管加入标本0.1mL,上述3管中均加入0.2mL试剂Ⅰ和0.2mL试剂Ⅱ,混匀,37℃准确水浴60min。然后上述3管中均加入0.2mL试剂Ⅲ和0.1mL试剂Ⅳ,充分旋涡混匀30 s,室温静置10min,3500～4000r/min离心10min,取上清显色。血浆一氧化氮含量=(测定管吸光度-空白管吸光度)／(标准管吸光度-空白管吸光度)×100μmol/L。⑥肾脏超微结构：将留取的大鼠肾脏,从肾皮质向髓质垂直取材,立即以戊二醛、多聚甲醛混合液作预固定,其后以1%四氧化饿固定,进一步处理,用光镜观察。光镜：已固定的肾组织标本,经常规脱水,石蜡包埋,在切片机下进行3um切片,HE染色,观察。结果：综合治疗A、B、C组可改善大鼠慢性肾功能衰竭的生存状态和组织病理变化,且综合治疗A组较优。综合治疗A、B、C组在治疗前后肾功能对比有统计学差异(P<0.01),综合治疗A、B、C组在治疗前后T、NO对比有统计学差异(P<0.05)。尿毒清组和非穴位敷贴组治疗前后肾功能、T、NO对比有统计学差异(P<0.05)。综合治疗A、B、C组治疗后与尿毒清组及非穴位敷贴组肾功能对比有统计学差异(P<0.05)。综合治疗A、B、C三组之间肾功能对比有统计学差异,A组疗效优于B组(P<0.05),A组疗效优于C组(P<0.05)。结论：本课题用慢性肾衰竭肾阳虚证大鼠模型,从大鼠一般情况、肾功能、性激素、血液动力学、肾性贫血、肾脏病理等方面,研究穴位敷贴治疗慢性肾衰竭肾阳虚证的作用机理,填补穴位敷贴治疗肾病实验研究的空白。将为该疗法下一步的开发应用打下基础。