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目的不同类型的肿瘤具有特征性的DNA甲基化模式,检测基因启动子甲基化状态有助于肿瘤的诊断,还可以作为预测疗效和判断预后的分子标志。已有研究表明雌激素受体(包括ERα和ERβ亚型)基因启动子在乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺癌等肿瘤中具有特征性的甲基化模式,而在白血病中是否也具有特征性的甲基化模式,国内还未见相关报道。本实验利用MSP方法、RT-PCR和免疫组化技术检测白血病中ERa基因启动子(ERα-A、ERα-B)和ERβ基因启动子的甲基化状态,以及ERα与ERβ的mRNA和蛋白表达的异常情况;同时观察肼苯哒嗪对ERα基因启动子去甲基化效果,以及ERα表达复活的状况。从而揭示白血病中ER基因启动子甲基化变化情况与基因表达的关系,并探讨肼苯哒嗪治疗白血病的潜在价值。方法1.白血病细胞株HL-60、MOLT-4、Jurkat的培养以及肼苯哒嗪对细胞株的处理。2.应用MSP检测白血病细胞株和正常人外周血单个核细胞中ERα-A、ERα-B和ERβ基因启动子CpG岛的甲基化状态。3.应用RT-PCR和免疫组化技术检测白血病细胞株ERα和ERβ的mRNA和蛋白表达。4.运用MSP、RT-PCR和免疫组化技术检测肼苯哒嗪处理后白血病细胞株中ERα-A、ERα-B CpG岛甲基化状态以及ERα的mRNA和蛋白表达的变化。结果1.在白血病细胞HL-60、MOLT-4、Jurkat中ERα基因启动子ERα-A、ERα-B均检出甲基化,ERβ启动子为非甲基化,而正常人外周血单个核细胞中ERα与ERβ启动子区均为非甲基化。2.在白血病细胞株HL-60、MOLT-4、Jurkat中,ERa完全失表达,而ERβ存在mRNA表达和蛋白表达。3.肼苯哒嗪处理HL-60、MOLT-4、Jurkat后,ERα基因启动子ERα-A、ERα-B的CpG岛均发生去甲基化并检测到ERα恢复mRNA和蛋白表达。结论1.ER的两种亚型ERα和ERβ在白血病细胞株存在着不同的甲基化状态,而在正常人外周血单个核细胞ERα和ERβ均为非甲基化状态,提示ERα基因启动子甲基化可能是白血病的分子致病机制之一。2.肼苯哒嗪可以使白血病细胞株ERα启动子去甲基化,同时恢复ERα基因mRNA表达和蛋白表达,说明启动子甲基化可能影响ERα基因的转录和翻译,肼苯哒嗪有望成为白血病去甲基化治疗的新药物。3.在白血病细胞株中ERβ的表达未发现异常。