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目的：探讨无血清悬浮培养法富集人胃癌SGC-7901悬浮细胞球的可行性，摸索其最佳成球条件；对所获取的成球细胞进行干性鉴定。方法：1．采用无血清悬浮培养法在含补充因子干细胞培养基及超低粘附环境中富集胃癌悬浮细胞球，通过补充因子种类和浓度的不同组合确定悬浮细胞球形成的最佳条件。2．球体形成实验检测成球细胞的自我更新能力；集落形成实验检测成球细胞的克隆增殖能力；免疫荧光实验检测成球细胞的多向分化能力；耐药实验检测成球细胞对氟尿嘧啶的耐药特性；裸鼠成瘤实验检测成球细胞的体内成瘤能力；蛋白质印迹法及流式细胞术检测成球细胞中CD44及Oct4的表达情况。结果：1．无血清含补充因子（EGF：20ng/ml、bFGF：10ng/ml、B27：2%、N-2：1%）干细胞培养基及超低粘附环境是人胃癌SGC-7901细胞悬浮成球的最佳条件，随着传代次数的增加，其成球速度加快，球体体积增大，立体镜像明显。2．球体形成实验结果显示6代以后的成球细胞较母代SGC-7901细胞形成悬浮细胞球的效率更高（28.6%vs4.1%），集落形成实验结果显示成球细胞较母代SGC-7901细胞具有更强的克隆增殖能力（78.3%vs20.4%）；耐药实验结果显示氟尿嘧啶对成球细胞的抑制率低于母代细胞（P＜0.05,RI=5.68）；裸鼠成瘤实验结果显示成球细胞较母代细胞致瘤时间短，成瘤体积大（3127mm3vs424mm3）。免疫荧光实验结果显示成球细胞在加入血清后干性相关蛋白Oct4的表达下降，同时下降的还有膜蛋白CD44；流式细胞术结果显示干性相关蛋白Oct4及膜蛋白CD44在成球细胞中的表达率均显著高于母代细胞（Oct4:96.03%vs4.69%;CD44:30.17%vs2.58%）。蛋白质印迹法结果显示Oct4及CD44的蛋白表达量在成球细胞中高于母代细胞（P＜0.05）。结论：1．无血清含EGF（20ng/ml）、bFGF（10ng/ml）、N-2（1%）、B27（2%）超低粘附环境是人胃癌SGC-7901细胞形成悬浮细胞球的最佳条件。2．悬浮形成的胃癌成球细胞经检验具有自我更新、多向分化、化疗耐药、成瘤能力强等干性特点，符合胃癌干细胞的鉴定标准，该方法是富集胃癌干细胞的有效途径。3．悬浮形成的胃癌成球细胞膜上高表达CD44，核内高表达干性相关蛋白Oct4，CD44/Oct4可能是潜在的胃癌干细胞干性标志物组合。