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目的:成釉细胞瘤（ameloblastoma,AB）是发病率较高的一种上皮性肿瘤,在发展中国家最为常见,在某些地区AB的发病率可高达牙源性肿瘤的36.3%。AB虽属于良性肿瘤,但具有局部侵袭性和高复发率的特点,具有交界性肿瘤的性质,甚至有远处转移的零星报道。AB在颌骨内发病率最高,随着病情加重,颌骨逐渐膨大,可导致面部畸形以及功能障碍。尽管很多学者针对AB中肿瘤细胞的增殖、分化、破骨机制、信号分子的表达及相关信号通路进行深入研究,但AB的具体发病机制尚未明确。微小RNA（microRNA,miRNA）是常见的非编码RNA之一,长度约为19-24个核苷酸。miRNA通过在转录后水平与信使RNA（messengerRNA,mRNA）的3’-非编码区（3’untranslated regions,3’UTR）结合从而沉默靶基因mRNA,进而调控基因的表达。研究发现miRNA在各种真核细胞中普遍存在,在机体的生长发育、脂肪代谢、细胞凋亡以及肿瘤的发病中发挥重要作用。miR-9-3p是近年发现的一种新的miRNA,已有研究揭示了miR-9-3p参与肿瘤的发生发展。本实验拟对miR-9-3p在AB中表达及对AM-1细胞增殖、迁移和侵袭功能进行研究,并探讨相关的分子调控机制,旨在为AB寻找敏感的诊断标记物及特异性干预治疗靶点,提高临床诊断治疗水平。研究方法:1、采用基因芯片技术,从AB和NOM组织中筛选出差异性表达的miRNA,结合生物信息学技术,将下一步研究对象确定为miR-9-3p。2、应用qRT-PCR,检测15对AB及NOM组织中miR-9-3p的表达;应用Western blot、qRT-PCR和IHC检测RBPJ在AB及NOM组织中的表达。3、应用转染技术将miR-9-3p mimics、si-RBPJ分别转染至AM-1细胞系中,采用CCK8、平板细胞克隆、流式细胞术检测其对AM-1细胞增殖能力、细胞凋亡能力的影响;采用细胞划痕实验检测其对AM-1细胞迁移能力的影响;采用Transwell侵袭实验检测其对AM-1细胞侵袭能力的影响。4、通过生物信息学网站对miR-9-3p的作用靶点进行预测,qRT-PCR、Western blot检测靶基因mRNA和蛋白水平的变化,双荧光素酶报告基因验证靶向关系;应用转染技术将不同组合的miR-9-3p mimics、miR-9-3p inhibitor、si-RBPJ转染至AM-1细胞中进一步明确靶向调控关系和其对Notch信号通路的影响。结果:1、选取基因芯片结果中表达有统计学差异（P<0.05）且变化大于2.0倍的miR-9-3p为下一步研究对象,miR-9-3p在AB组织中的表达是对照组的0.348倍。2、qRT-PCR发现miR-9-3p在AB组织中的相对表达量显著低于NOM组织（P<0.05）;qRT-PCR、Western blot发现RBPJ在AB组织中的相对表达量显著高于NOM组织（P<0.05）;Pearson相关分析显示miR-9-3p与RBPJ在AB组织中的表达呈强负相关（R=-0.6943,P<0.05）;IHC发现在AB组织中RBPJ的相对表达量显著高于NOM组织（P<0.05）,且与疾病的侵袭密切相关。3、应用转染技术将AM-1细胞中转入miR-9-3p mimics,CCK8、平板细胞克隆和流式细胞仪检测细胞周期。结果显示,与对照组相比,细胞增殖能力显著降低（P<0.05）;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果显示,与对照组相比,细胞迁移能力显著降低（P<0.05）;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果显示,与对照组相比,细胞侵袭能力显著降低（P<0.05）;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果显示,与对照组相比,细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）。4、生物信息学网站预测RBPJ是miR-9-3p的主要靶基因之一,双荧光素酶活性检测实验验证了miR-9-3p可以与RBPJ 3’UTR特定性结合,过表达miR-9-3p后,可抑制RBPJ 3’UTR WT组相对荧光素酶活性。5、应用转染技术将AM-1细胞中加入si-RBPJ,CCK8、平板细胞克隆和流式细胞仪检测细胞周期。结果显示,与对照组相比,细胞增殖能力显著降低（P<0.05）;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果显示,与对照组相比,细胞迁移能力显著降低（P<0.05）;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果显示,与对照组相比,细胞侵袭能力显著降低（P<0.05）;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果显示,与对照组相比,细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）,与miR-9-3p mimics的功能相一致。6、应用转染技术将AM-1细胞中加入miR-9-3p mimics,miR-9-3p inhibitor、si-RBPJ的不同组合,与对照组相比,qRT-PCR、Western blot发现,转入miR-9-3p mimics组和si-RBPJ-3组Notch4、Jag1的表达无变化,而Hey1表达明显降低（P<0.05）;转入miR-9-3p inhibitor组Notch4、Jag1的表达无变化,而Hey1的表达明显升高（P<0.05）;转入miR-9-3p mimics+si-RBPJ-3组Notch4、Jag1的表达无变化,而Hey1的表达降低最为显著（P<0.01）;转入miR-9-3p inhibitor+si-RBPJ-3组Notch4、Jag1、Hey1的表达均无明显变化（P>0.05）。结论:1、结合基因芯片技术,发现miR-9-3p在AB组织中低表达,RBPJ在AB组织中高表达,miR-9-3p与RBPJ的表达呈强负相关性,且RBPJ的表达与AB侵袭密切相关。2、过表达miR-9-3p或者抑制RBPJ表达可以显著抑制AM-1细胞增殖、迁移和侵袭能力,但对AM-1细胞的凋亡无影响。3、RBPJ是miR-9-3p作用的靶基因之一。4、MiR-9-3p通过靶向RBPJ调控Notch信号通路。