热激蛋白(Heat Stress Protein, HSP)是一种在细胞中普遍存在并具有高度保守性的蛋白,在动物适应环境、提高其耐受性、实现自我保护和损伤修复的过程中都发挥重要作用。KK-42是一种咪唑类保幼激素拮抗物。我们的前期研究已经证明,使用KK-42处理凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)虾苗,可以显著提高其成活率,但是对于KK-42提高凡纳滨对虾成活率的机理仍不了解。鉴于HSP70和HSP90在生物环境适应性和自我保护方面的重要作用,我们以凡纳滨对虾为材料,研究了KK-42对上述两种基因表达的影响。实验采用浸润法,用1.95×10-4 M的KK-42对凡纳滨对虾幼虾(体长3.5-5.0 cm)进行处理,浸润时间为1 min,然后按正常方法饲养。实验过程中定期采样,解剖取其眼柄、肝胰腺、大颚器官、肌肉等组织,提取各组织器官中总RNA并进行反转录,研究了HSP90和HSP70的组织分布,采用RACE技术从其肝胰腺中克隆出凡纳滨对虾HSP90的cDNA全长序列,并对其进行序列分析,后进行荧光实时定量PCR,对肝胰腺中HSP90和HSP70的时空表达进行检测并研究了KK-42对其基因转录的影响。凡纳滨对虾HSP90基因的cDNA全长2543个碱基,该基因5’ -端非翻译区(5’-UTR)长105 bp,3’ -端非翻译区(3 ’-UTR)长278 bp,开放阅读框(ORF)2160 bp,编码720个氨基酸,预测其蛋白质分子量为82.8 kD,理论等电点分别为6.65。其C端具有保守的EEVD结构,证明其为一种细胞质HSP,多序列比对结果显示凡纳滨对虾HSP90的氨基酸推导序列与中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)和刀额新对虾(Metapenaeus ensis)的同源性高达97.80%和97.22%。组织半定量结果显示,hsp 90和hsp 70在凡纳滨对虾大颚器官、眼柄、肌肉和肝胰腺中都有表达,其中,肝胰腺中的表达水平较高。荧光实时定量结果显示,实验期间,肝胰腺中两种HSP mRNA水平虽有一定波动,但含量相对较低;KK-42处理可显著诱导肝胰腺hsp的表达,在处理后第1、2、3天,HSP70和HSP90 mRNA含量分别比相应的对照组升高了243.4%、141.3%、410.5%和121.6%、505.5%、481.7%。结果表明,KK-42处理可显著刺激凡纳滨对虾肝胰腺HSP90和HSP70基因的转录,这可能是其提高成活率的原因之一。