骨髓间充质干细胞对胰腺导管腺癌免疫抑制作用的研究

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目的:越来越多的研究表明,骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)与肿瘤的发生发展过程密切相关,但其具体机制尚未完全清楚,而与胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma, PDAC)患者免疫抑制状态的相关研究更是未有文献报道。本实验旨在研究胰腺导管腺癌患者外周血中骨髓间充质干细胞的分布状况及胰腺导管腺癌免疫抑制状况,具体探讨骨髓间充质干细胞及调节性T细胞(Regulatory T cells, Treg cells)在胰腺癌患者外周血中的分布情况;同时观察外周血中免疫抑制相关细胞因子的变化情况及胰腺导管腺癌组织病理切片中免疫相关细胞的表达。方法:选取从2011年6月至2012年3月在复旦大学附属中山医院就诊的胰腺导管腺癌患者30例,通过免疫荧光标记及流式细胞分析方法对患者外周血中MSCs、 Treg细胞进行鉴定及定量分析。通过酶联免疫吸附剂测定方法(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)检测胰腺导管腺癌患者外周血清中免疫抑制相关细胞因子白介素-6(Interleukin-6, IL-6),成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)及血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。同时选取2009年6月至2010年12月复旦大学附属中山医院病理科胰腺导管腺癌组织存档石蜡包埋标本40例,通过免疫组织化学法检测其病理切片中癌相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblas, CAF)特异性标记物成纤维细胞活化蛋白(Fibroblast active protein,FAP)及树突状细胞(dendritic cells, DC)标记物CD1a的表达。结果:流式细胞仪分析结果显示在胰腺导管腺癌患者外周血中MSCs及调节性Treg细胞的比例较健康对照组明显增高;同时伴有外周血清中免疫抑制相关细胞因子IL-6、FGF和VEGF因子浓度的升高;免疫组织化学染色方法发现在胰腺导管腺癌病理切片中FAP阳性细胞仅在肿瘤间质中有表达,而正常组织中不表达,并且CAF细胞的数量与肿瘤的大小相关。而病理切片中DC细胞数量减少,且DC的浸润程度与肿瘤的大小及淋巴结转移情况相关。通过相关性分析发现胰腺导管腺癌患者外周血Treg的数量与其外周血清中IL-6、FGF和VEGF含量呈正相关性。经统计学处理组间差异有显著意义(p<0.05,SPSS16.0)。结论:胰腺导管腺癌患者外周血中的骨髓间充质干细胞(MSCs)及调节性T细胞(Treg)比例的增高可能在胰腺导管腺癌的发生和发展中发挥着重要作用。Treg细胞可能通过调节免疫抑制因子的表达影响免疫抑制状况。相关性分析提示Treg比例升高与免疫抑制因子表达升高具有相关性。Treg细胞可能通过分泌免疫抑制因子引起免疫微环境的免疫抑制状态。此外,胰腺癌临床病理指标的关系研究中发现CAF与胰腺肿瘤大小有关,DC与胰腺肿瘤的大小及淋巴转移情况有关。
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