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研究背景和目的结直肠癌患者预后不良的主要原因是肿瘤的侵袭和转移。因此,深入研究结直肠癌侵袭转移分子机制具有重要意义。STX2属于高度保守的突触融合蛋白家族成员,主要参与细胞内囊泡运输和分泌。但关于STX2在结直肠癌发生、发展,特别是侵袭、转移过程中的作用和相关分子机制尚不清楚。本研究拟通过一系列分子生物学技术检测STX2在结直肠癌侵袭、转移过程中的作用和相关分子机制。方法:1.运用生物信息学软件及qRT-PCR、Western blot和IHC技术检测STX2在结直肠癌中的表达情况;并分析其表达与各临床病理参数及患者预后间的关系;2.通过一系列体内外功能实验检测STX2对结直肠癌细胞侵袭、转移能力的影响;3.运用GSEA基因富集方法分析STX2高表达芯片数据中相关信号通路的富集情况;4.通过双荧光素酶报告基因实验、Western blot、核浆分离、IF、qRT-PCR和ELISA实验验证STX2对NF-κB信号通路的调控作用;5.通过LC-MS/MS技术纯化分析STX2相互作用蛋白;通过Co-IP及IF进一步验证STX2与TRAF6蛋白间的相互作用;6.通过qRT-PCR和Western blot实验验证STX2对TRAF6的调控作用;7.通过双荧光素酶报告基因实验验证干扰TRAF6或用PDTC处理后STX2对结直肠癌细胞中NF-κB信号通路活性的影响;同时通过一系列的体内外功能回复实验进一步验证其对结直肠癌细胞体内、外侵袭和转移能力的影响;8.利用qRT-PCR、Western blot和IHC技术检测结直肠癌组织样本中STX2与TRAF6表达的相关性;qRT-PCR技术检测新鲜结直肠癌组织样本STX2与TNFa和IL6表达的相关性;9.ChIP实验检测NF-κB P50与STX2启动子特异性位点的结合情况。结果:1.STX2在结直肠癌组织中高表达,且其表达与各临床病理参数和患者预后密切相关(p<0.05);2.STX2过表达促进结直肠癌细胞的侵袭和转移(p<0.05);干扰STX2的表达抑制结直肠癌细胞的侵袭和转移(p<0.01);3.NF-κB信号通路相关基因在STX2高表达结直肠癌芯片数据中显著富集(p<0.01);4.STX2可以调控NF-κB信号通路活性;5.STX2与TRAF6蛋白间存在着相互作用;6.STX2可以调控TRAF6的表达(p<0.01);7.STX2通过调控TRAF6影响NF-κB信号通路活性(p<0.01),进而影响结直肠癌细胞的侵袭和转移能力(p<0.01);8.结直肠癌组织中STX2与TRAF6、TNFa及IL6表达正相关(p<0.05);9.STX2启动子区存在NF-κB P50的结合区域。结论:1.STX2在结直肠癌中表达上调并促进结直肠癌的侵袭和转移;2.STX2促进结直肠癌的侵袭和转移作用是通过靶向调节TRAF6进而激活NF-κB信号通路实现的;3.NF-κB信号通路激活驱动STX2的转录表达;4.STX2对NF-κB信号通路的激活在结直肠癌中形成一个正反馈环路;本研究将为结直肠癌的治疗和预后提供新靶标。