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苦豆子(Sophora alopecuroides)为豆科(Leguminosae)槐属多年生草本植物,包括苦豆子的干燥全草、根及种子,为根茎地下芽旱生耐盐植物,主要分布于我国的西北部地区。苦豆子虽具有广泛的药理学活性,但苦豆子属于有毒植物,家畜采食一定量会发生中毒症状。苦豆子生物碱是苦豆子中的主要化学成分,苦参碱(Matrine,MT)和槐定碱(Sophoridine,SRI)是苦豆子生物碱中相对含量较高的两种生物碱,相关研究表明,一定浓度范围内的苦参碱对肝细胞具有一定的毒性作用,出现细胞数量减少、死亡细胞数增多、细胞核碎裂等现象,但是其作用机制尚需进一步研究,本文就苦参碱和槐定碱对BRL-3A细胞的毒性作用及诱导BRL-3A细胞凋亡的机制进行研究,结果如下:1.苦参碱和槐定碱对BRL-3A细胞增殖作用的影响:用含0.5,0.75,1,1.25,1.5,1.75,2 mg/m L苦参碱和0,0.25,0.31,0.39,0.49,0.61,0.77,0.96,1.20,1.50 mg/m L槐定碱的完全培养液对BRL-3A细胞分别攻毒12h、24h、48h后测定吸光度值。抑制率的计算结果显示,苦参碱和槐定碱能够抑制BRL-3A细胞的增殖,并且具有时间剂量依赖性。2.苦参碱和槐定碱对BRL-3A细胞毒性作用研究:用含0,1,1.5,2 mg/m L苦参碱和0,0.25,0.5,0.75 mg/m L槐定碱的完全培养液对BRL-3A细胞攻毒24h,用乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒检测细胞毒性。结果显示,随着苦参碱和槐定碱攻毒浓度的增加,LDH的释放量逐渐增多,苦参碱和槐定碱对BRL-3A细胞的毒性作用逐渐增强,差异极显著(P<0.01),表明苦参碱和槐定碱对BRL-3A细胞具有显著的毒性作用,呈剂量依赖性。3.苦参碱和槐定碱诱导BRL-3A细胞凋亡的形态学观察:用含0,1,1.5,2 mg/m L苦参碱和0,0.25,0.5,0.75mg/m L槐定碱的完全培养液对BRL-3A细胞攻毒24h,DAPI染色,于荧光显微镜下观察结果并拍照记录。结果显示,与对照组相比,苦参碱和槐定碱处理组细胞核均出现了较为典型的细胞凋亡特征,如细胞数量减少、形态不规则、细胞染色质凝聚,核固缩,染色加深等,说明从形态学角度来看,苦参碱和槐定碱能够诱导细胞凋亡。4.苦参碱和槐定碱诱导BRL-3A细胞凋亡的检测:用含0,1,1.5,2 mg/m L苦参碱和0,0.25,0.5,0.75mg/m L槐定碱的完全培养液对BRL-3A细胞攻毒24h,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果显示,苦参碱和槐定碱能够诱导细胞凋亡,与对照组相比苦参碱处理组凋亡率逐渐升高,差异极显著(P<0.01),槐定碱处理组细胞凋亡率也逐渐升高,呈剂量依赖性。5.苦参碱和槐定碱诱导BRL-3A细胞凋亡相关蛋白的表达:用含0,1,1.5,2 mg/m L苦参碱和0,0.25,0.5,0.75mg/m L槐定碱的完全培养液对BRL-3A细胞攻毒24h,提取全蛋白,进行Western Blot试验,检测各蛋白的表达水平。结果显示,与对照组相比,苦参碱和槐定碱处理组,Caspase3/9的表达水平上调,差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);Bax/Bcl-2的比值升高;苦参碱处理组Fas L和CD95的表达水平均低于对照组,差异极显著(P<0.01);槐定碱处理组Fas L和CD95的表达水升高,差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);p38的表达水平均降低,差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),p38磷酸化水平均逐渐升高,且表现为差异极显著(P<0.01),总的来说,苦参碱能够通过线粒体通路诱导BRL-3A细胞发生凋亡而槐定碱主要通过死亡受体通路和线粒体通路相互作用诱导细胞凋亡,p38MAPK信号通路可能参与苦参碱和槐定碱诱导的细胞凋亡。