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胰腺癌(pancreatic cancer,PC)是临床上恶性程度极高的多见的消化系统肿瘤之一,在我国成人恶性肿瘤去年的情况调查中显示:胰腺恶性肿瘤发病率排第8位,死亡率排第7位。而且近十年里,发病率和致死率明显呈逐年上升势态。胰腺癌临床上极低的生存率我们发现主要是由于胰腺癌患者早期无明显特异性的临床症状,往往难于被发现。往往确诊肿瘤时,已合并外周器官的广泛转移,失去手术根治的机会。由于缺乏早期诊断和确实有效的治疗方法,这些患者的中位生存期大多不超过半年。尽管在手术方式的改良和术前辅助治疗上倾注了很多的努力,进展期PC的死亡率在过去十年仍居高不下。既往的研究中虽然发现了一些与PC诊断或预后相关的因素,但最终经过临床观察对患者预后和总生存率的提高不显著。因此,对PC的肿瘤恶性行为的探索及分子水平上肿瘤发生发展机制的探讨有深远的临床意义。我们的研究将为帮助PC临床早期诊断、寻找新的治疗靶点,预测预后及有效治疗提供有力的证据及指导。Lnc(Long non-coding)RNAs是一类长度超过200个核苷酸。越来越多的证据表明,Lnc RNAs虽不具有编码蛋白质的能力,但lnc RNAs可能参与多种类型的如转录、表观遗传及转录后调控等的一系列基因调控过程。lnc RNAs被发现在人类细胞胞核及胞浆中广泛表达,并参与增殖、凋亡、细胞周期及细胞分化等多种生物学事件,已经成为继信使RNA、小RNA之后功能基因组学最火热的研究领域。ABHD11-AS1是位于7q11.23的lnc RNA癌基因。从前,它以长基因间非蛋白编码RNA 35(LINC00035)和Williams-Beuren综合征染色体区域26(WBSCR26)的名称被识别。有研究发现,ABHD11-AS1在多种肿瘤中表达失调,包括膀胱癌,子宫内膜癌与上皮性卵巢癌等。ABHD11-AS1在胃癌组织中表达水平显著升高,其表达的高度特异性让ABHD11-AS1近年来成为胃癌潜在的临床标志物。ABHD11-AS1被发现在PC中也有表达,然而它的具体表达状况、作用机制及临床应用的可行性却无相关的研究性报告。基于这些相关背景,本实验室拟采用在组织水平检测PC中ABHD11-AS1的表达状况;在临床层面上分析ABHD11-AS1与患者临床病理特性及生存期等预后的相互关系;同时在分子水平上探究ABHD11-AS1在PC中的调控机制及作用途径,从而深入探索ABHD11-AS1是否能成为PC新的分子标记物,并探究其成为PC的临床早期诊断和精准靶向治疗新的靶点的可行性。方法1.在器官组织水平,采用q RT-PCR技术检测PC组织和PC旁正常胰腺组织中ABHD11-AS1的表达情况;全面分析患者临床关键性指标特别是预后与ABHD11-AS1表达情况的相互关系。2.在细胞水平,采用q RT-PCR技术检验ABHD11-AS1在多株PC细胞系中的表达情况。构建ABHD11-AS1干扰质粒,经过慢病毒包装稳定后,转染ABHD11-AS1相对高表达的PC细胞株,然后再通过q RT-PCR法检测ABHD11-AS1的表达情况。3.在体外环境中分别通过MTT法、流式细胞仪检测技术、细胞划痕实验、细胞克隆形成实验、细胞迁移侵袭试验技术(Transwell)、免疫印迹试验(Western Blot)等方法检测PC细胞在ABHD11-AS1基因表达被敲低后对增殖、凋亡、迁移及侵袭能力和EMT相关蛋白表达的影响;4.通过Western blot方法进一步验证了ABHD11-AS1通过PI3K/AKT途径的异常表达对PC细胞产生影响。结果1.我们的实验显示:ABHD11-AS1的表达水平在PC组织中明显高于PC旁正常胰腺组织。ABHD11-AS1在PC组织中的高水平表达与肿瘤远处转移、TNM分期和肿瘤分化程度有相关性。Kaplan-Meier分析显示高ABHD11-AS1的表达水平预示着更差的生存率及预后情况。此外,单因素和多因素分析提示ABHD11-AS1的表达是与总生存率低相关的一个重要的独立因素。2.体外的细胞实验结果发现,通过敲低ABHD11-AS1的基因表达后可明显的减少PC的细胞增殖,增进PC的细胞凋亡,抑制细胞克隆的形成,可明显的降低胰腺癌的细胞迁移及侵袭能力以及EMT相关蛋白的表达。3.体外实验结果发现,进一步干扰ABHD11-AS1基因表达后,Western blot一系列实验结果显示,PC细胞中磷酸化(p-)的AKT与磷酸化(p-)的PI3K蛋白表达明显减少,但AKT和PI3K在PC细胞中的表达未受影响。结论1.在组织中,胰腺癌ABHD11-AS1表达水平显著增高。被高水平表达的ABHD11-AS1与肿瘤远处转移、TNM分期和肿瘤分化密切相关,可以作为判定PC预后不良的一个独立危险因素。2.在体外实验中,ABHD11-AS1能促进PC的细胞增殖、细胞迁移及侵袭能力,同时能够抑制PC细胞的凋亡并影响EMT相关蛋白的表达。3.ABHD11-AS1可能是通过激活PI3K/AKT信号通路,而进一步影响PC的恶性生物学行为的。