花生茎叶提取物促睡眠活性物质鉴定及作用机制研究

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我国是花生生产大国,每年生产花生茎叶大于100,0000吨(干重),其综合利用备受关注。在亚洲某些地区,花生茎叶作为一种传统的草本药物和特殊食物已有历史。在我国,其药用历史最早可追溯至明洪武年间。其治疗失眠、抗抑郁、抗焦虑的作用在著名药典《滇南本草》、《浙江药用植物志》以及《中药大辞典》中均有记载。近年来,围绕花生茎叶促睡眠活性开展了很多研究,但其物质基础与功能活性机制均未明确,产品形式也较为单一。本论文基于我国花生产业背景、花生茎叶药用价值以及研究进展,对花生茎叶提取物的物质组成、促睡眠活性机制以及相关产品的开发进行了研究。使用高分辨率液质联用仪(UPLC-QTOF-MS)和先进的数据分析平台(UNIFI)研究了花生茎叶提取物的物质组成。试验筛查了8大类287种化合物,其中207种为首次在花生种属中鉴定得到。同时比较了石油醚、乙酸乙酯、正丁醇的提取效率,确定了针对不同物质的最适提取溶剂。结果表明乙酸乙酯萃取组分中可生物碱、甾体及苷类物质提取效率最高,其它6种物质(萜类,醌类,木脂素类,黄酮及黄酮苷类,其它类,未归类)的优势提取溶剂均为石油醚。根据相关化合物的研究基础和结构特性,使用高灵敏度液质联用仪(UPLC-QQQ-MS)对花生茎叶提取物中可能具有改善睡眠活性的4种化合物(柚皮素-4,7’-二甲醚、2’-O-甲基异甘草素、阿魏酸、芳樟醇)进行定量分析;开展动物实验,重点研究了四种假定生物活性物质以及花生茎叶提取物对受试动物行为学和各脑域神经递质进行了研究。研究表明四种生物活性物质在花生茎叶提取物中的具体含量依次为114.75±3.42 mg/kg、32.40±0.02 mg/kg、44.44±0.37 mg/kg、189.86±11.40μg/kg;200mg/Kg(体重)的花生茎叶提取物及相当剂量的四种生物活性物质能够显著降低试验小鼠的自主活动能力,抑制对巴比妥钠/戊巴比妥钠的耐药性,能够对多巴胺(DA)等4条信号通路上的6种神经递质实施有效干预,进而实现改善睡眠的功能活性,同时表明了柚皮素-4,7’-二甲醚、2’-O-甲基异甘草素、阿魏酸、芳樟醇4种物质为花生茎叶提取物改善睡眠作用的物质基础。对原辅料品种、比例等因素进行探究和对混料工艺进行优化,通过对产品物理指标(片重差异、崩解时限)和感官指标(外形、色泽、滋味、硬度)进行评价,最终确定了生产花生茎叶提取物促睡眠含片的最优工艺:以30%的预糊化淀粉,0.5%微粉硅胶,0.8%硬脂酸镁和5%的乙醇水溶液为辅料配方,以乙醇溶液与预糊化淀粉预混匀后再与其它原料进行混合的混料办法组成的压片工艺。该工艺的确定打破了市面上花生茎叶促睡眠产品形式单一、机制不明的现状,对花生茎叶的综合利用以及类似小宗草本药用植物的推广应用具有深远的意义。
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