al-抗胰蛋白酶(Alpha-1 Antiaypsin，以下都简称ocl-AT，)，在体内主要由肝脏合成。在电泳中，其迁移位点位于al蛋白带，因而又被称为al-蛋白酶抑制剂(Alpha-1 Proteinase Inhibitor，al-PI)。a1-AT是体内最重要的蛋白酶抑制物，主要抑制胰蛋白酶和弹性蛋白酶的活性，作为血液制剂，al-AT主要用于因遗传性a1-AT缺乏而引起的肺气肿患者的终身替补治疗以及肺部炎症疾病的防治，在临床上有比较广泛的应用前景。 本文根据猪血浆中al-AT与人al-AT理化性质的相似性，参考人al-AT的制备方法，从猪血浆中提取纯度较高的al-AT。主要方法为盐析、离子交换层析、亲和层析和凝胶过滤层析，经过这四步后，活性和纯度大大得到提高，酶活性回收率为11.0％，纯化倍数达到25.6倍。 对离子交换层析，亲和层析和凝胶过滤层析的条件进行了优化，得出最佳分离条件，最大程度的保留了目的蛋白活性，获得了较高的回收率。离子交换层析所选择的条件为：平衡缓冲液为0.05mol/L，pH6.4 PBS；上样浓度2.0mg/mL，上样50mL，上样流速为1.0ml/min；洗脱液为0.05mol/L，pH6.4，含0.5：mol/LNaClPBS，洗脱流速2.0m1/min，采用一步洗脱的方式洗脱。亲和层析所选择的条件为：上样浓度1.0 mg/mL，上样10mL，上样流速为0.5mg/mL；洗脱液为0.05mol/L，pH7.6，含0.5 mol/LNaCl，0.2mol/L a-甲基-D-葡萄糖苷Tris-HCI缓冲液，洗脱流速1.0m1/min，采用一步洗脱的方式洗脱。凝胶过滤层析所选择的条件为：上样浓度为10mg/mL，上样5mL，洗脱液为0.05mol/L，pH7.6 Tris-HCl缓冲液，洗脱流速为0.5m1/min。 接下来本文对猪a1-AT的理化性质进行了研究，主要有al-AT的紫外吸收，分子量，糖含量，等电点和氨基酸组成，并制备了抗血清。对a1-AT光吸收波谱扫描，得出猪a1-AT的紫外吸收峰在260-300nm之间，其中波谷在260nm，波峰在280nm；SDS-PAGE电泳检测了每步的纯度并测定了a1-AT分子量，得出a1-AT分子量为52.98KDa；SDS-PAGE电泳后的凝胶用过碘酸-schiff试剂染色，表明a1-AT为糖蛋白；进一步用苯酚一硫酸法测定其含糖量为12.20％；等电聚p焦电泳法测αl-AT的等电点，得出其等电点为4.0、4.2、4.5，较明显的为4.2这条带；高效液相法分析待测α-AT与标准人αl-AT的氨基酸组分，由于待测αl-AT与标准人αl-AT纯度不够高，因此测得结果部分氨基酸的含量相差较大，无法进行比较；纯化出的猪αl-ART免疫兔子，制备出兔抗猪抗血清，经琼脂糖免疫双扩散检测出其抗血清的效价为1∶16。 影响αl-AT活性的因素主要有温度、pH和保存时间，冻融次数等。Αl-AT活性能保持较高水平的条件是温度在4—40℃；pH值在6.0-10.0；αl-AT应保存在低温下，偏碱的缓冲液中，分装保存，减少冻融次数。长期不用，-20℃保存较好，活性下降较小。 另外，本文还对αl-AT抑制胰蛋白酶的反应动力学进行了研究。确定了合适的反应时间为10min，BAPNA溶液浓度为0.2mg/mL，胰蛋白酶的浓度为4．0mg/mL；米氏Km=3.42 mg/mL，最大反应速度V<,max>=0.048 mg/(min-mL)。 通过对猪αl-AT和人αl-AT理化性质的比较，得出大部分性质是一致的，其小部分性质的差异是由本身的结构所造成的，需要进一步研究。这些对比的结果，可作为猪αl-AT以后可能替代人猪αl-AT的理论基础。