组织工程是一门新兴的边缘学科，它是利用生物学和工程学原理研究、开发用于修复、维持和改善损伤组织功能的组织替代物的一门学科。自从80年代正式确立以来，已经取得了突飞猛进的发展，目前处于研发阶段的组织工程产品很多。组织工程产品不但解决了供者器官来源不足的问题，而且大幅减轻了发生异体移植物排斥反应的危险。 本研究在实验室成功培养了组织工程复合皮肤，通过建立同种异体皮肤移植动物模型，成功进行了组织工程皮肤的同种异体移植实验，检验了组织工程皮肤的生物学活性。 实验一、大鼠同种异体皮肤移植模型的建立 选用封闭群Wistar大鼠和SD大鼠进行皮肤移植试验，确定这两组动物作为组织工程复合皮移植动物模型的可行性，为以后的组织工程皮肤移植研究提供根据。结果证实了SD大鼠和Wistar大鼠之间皮肤移植组织相容性差，同种异体皮肤移植后有强烈的免疫排斥反应，可以作为同种异基因移植模型。 实验二、大鼠全层组织工程皮肤的研制 运用组织工程的方法培养SD大鼠的全层复合皮肤。以免疫原性较低的新生SD仔鼠背部皮肤为取材对象，分离表皮细胞和成纤维细胞，将成纤维细胞种植入Ⅰ型胶原凝胶中，培养3天后，将表皮细胞接种在凝胶的表面，继续培养2天，然后将疑胶移至气液面进行复层化。结果发现所培养的人工皮肤具备表皮层和真皮层，其结构和正常皮肤的结构相似。证明了以新生SD仔鼠皮肤为细胞来源、Ⅰ型胶原为支架构建的全层组织工程皮肤，在组织学上与皮肤组织结构一致，可以作为皮肤替代物。 实验三、同种异体组织工程皮肤移植治疗皮肤缺损的研究 20g·L^-1戊巴比妥钠腹腔注射30～50mg·kg^-1麻醉，在Wistar大鼠背部切 第四军医大学硕土学位论义 取全层皮作圆形创面，直径3Cth，以供皮肤移植。实验动物分为3组：自体移 植组、异体移植组和组织工程皮肤移植组。分别于第3、7、14、20、30d取标 本作HE染色、VG染色、Gomori网状纤维染色、Weigert弹力纤维染色，观察 组织学变化。发现组织工程皮肤具有良好的组织相容性和生物学活性，与受者 愈合良好，未见显著的免疫排斥反应。 实验四、TNF－a、ILZ在同种异体皮肤移植中作用的研究 免疫组织化学方法、Western Blot分析检测三组不问实验组移植皮肤组织 中 TNFa和 IL2的变化，放射免疫学方法分析受体血清中 TNF－a和 IL．2水平 的改变，探讨它们在皮肤移植排斥中的作用，评估组织工程皮肤的免疫原性。 发现组织工程皮肤移植后，局部组织中 TNFa和 IL2水平显著低于同种异体 皮肤组，说明组织工程皮肤只具有很弱的免疫原性。 实验五、T细胞亚群对同种异体皮肤移植的影响 大鼠皮肤移植排异反应中T淋巴细胞亚群的观察。在T细胞介导的同种移 植排异反应中哪种T细胞亚群起主要作用尚有争议，本实验通过检测三组不同 实验组的CD4＼CDS＋T细胞亚群的情况，结合病理形态变化，探讨其在皮肤 移植排异反应中的作用，结果肯定了CD4“T细胞亚群在同种异体皮肤移植后免 疫排斥反应的发生发展中较CDS＼细胞亚群具有更重要的作用。 实验六、选择素家族在同种异体皮肤移植中的作用 内皮细胞选择素的表达及其介导的白细胞趋化为免疫排斥反应中的重要环 节，通过比较选择素P和选择素E在大鼠同种异体皮肤移植和组织工程皮肤移 植中表达的差异，发现选择素P和选择素E的高表达与同种异体皮肤移植后的 免疫排斥反应的发生具有同步性。组织工程皮肤组未见明显的免疫排斥反应， 同时也没有选择素P和选择素E的高表达，说明这两种选择素在免疫排斥发生 发展中也具有一定的促进作用。 本研究成功研制了组织工程SD大鼠皮肤，建立了皮肤移植动物模型，通 ．4． 第凹军医大学颅土学位论义过同种异体动物皮肤移植实验，证实组织工程皮肤具有良好的组织相容性和生物学活性，肯定了组织工程皮肤的临床应用可行性，为以后进一步发展人组织工程皮肤以及临床应用奠定了坚实的基础。