实验目的：　　研究和厚朴酚(HNK)对人结肠癌LOVO细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用，进一步探讨其可能的作用机制。　　实验方法：　　1.采用结晶紫染色法观察不同浓度的HNK对人结肠癌LOVO细胞的抗增殖作用，并进行定量分析。　　2.利用FCM法，观察HNK对LOVO细胞的细胞周期和凋亡的作用。并运用Western blot检测PCNA, caspase-3的表达情况。　　3.应用RT-PCR法检测HNK对LOVO细胞cyclin D1, cyclin D2, p21, p53, MDM2, Akt1, Akt2 mRNA的影响；应用Western blot检测cyclin D1, p53，p-p53，MDM2, Akt1/2及磷酸化的表达。　　4.分别运用结晶紫染色和FCM检测HNK和Ad-p21对LOVO细胞的增殖凋亡影响。　　实验结果：　　1.结晶紫染色结果表明，和厚朴酚能够抑制LOVO细胞的增殖作用，并且呈现浓度和时间依赖性。　　2. FCM结果显示，HNK能诱导LOVO细胞的凋亡，且使LOVO细胞呈现G1阻滞。Western blot结果显示，HNK能下调PCNA表达量，而上调caspase-3，均呈浓度依赖性。　　3. RT-PCR结果表明，随着HNK浓度的增加，LOVO细胞cyclin D1, MDM2，Akt2 mRNA的转录水平逐渐降低，cyclin D2降低不明显, Akt1无明显变化,而p21, p53是逐渐升高的。Western blot结果表明，p53蛋白及磷酸化表达量是随着浓度增加而增加，而cyclin D1, MDM2， Akt1/2及磷酸化水平却是降低。　　4.外源性过表达p21环境下，HNK对LOVO细胞的抗增殖和诱导凋亡效果进一步增强。　　实验结论：　　在人结肠癌LOVO细胞中，HNK能明显地产生增殖的抑制作用，且阻滞G1期，诱导细胞凋亡；其作用机制可能与HNK在LOVO细胞中抑制cyclin D1的表达及调控Akt/MDM2/p53/p21信号转导有关。　　实验目的：　　观察环磷酰胺衍生物4,6-二苯基环磷酰胺（4,6-diphenyl cyclophosphamid,9b）对人乳腺癌MCF-7细胞的抗增殖作用，并探讨其抗增殖作用的可能机制。　　实验方法：　　1. MTT检测MCF-7细胞增殖；FCM检测细胞凋亡。　　2. RT-PCR，Western blot检测Bcl-2和Bax mRNA和蛋白的表达。　　实验结果：　　1.9b能浓度和时间依赖性的抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖（P＜0.05，P＜0.01），IC50为87.07μmol·L-1（48h）；经43.54μmol·L-1（1/2 IC50）的药物处理48小时，可诱导细胞凋亡（P＜0.01），凋亡比率为18.36％。（引用前期研究结果[1]）　　2. RT-PCR，Western blot结果提示，9b可促进Bcl-2 mRNA和蛋白的表达（P＜0.01），而抑制Bax mRNA和蛋白的表达（P＜0.01）。　　实验结论：　　9b能对人乳腺癌MCF-7细胞产生抗增殖作用，并诱导细胞凋亡，其作用机制可能与调节Bcl-2和Bax的表达有关。