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糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)代谢异常引发的肾小球硬化症,是国内外引起终末期肾病(ESRD)的常见病因。由于DN患者机体存在及其复杂的代谢紊乱,一旦发展至ESRD,治疗上往往更加困难,因此,探索其发病机制,以制定更加行之有效的防治手段,已成为当前内分泌学界和肾脏病学界迫切的愿望。目的建立DN小鼠模型并检测血生化变化情况,探讨Klotho(KL)基因在DN小鼠的表达及肾安颗粒的干预作用。方法62只C57BL/6小鼠随机分成:正常对照组(A组,n=12),模型组(B组,n=12)、氯沙坦组(C组,n=12)、肾安颗粒低剂量组(D组,n=13)、肾安颗粒高剂量组(E组,n=13)。予链脲佐菌素(STZ)150 mg/kg单次腹腔注射造成糖尿病肾病模型。进行药物干预治疗,正常对照组及模型组小鼠灌服蒸馏水10ml/(kg·d);氯沙坦组灌服氯沙坦混悬液,剂量为为10ml/(kg·d);肾安颗粒高、低剂量组均灌服肾安颗粒混悬液,剂量分别为4ml/(kg·d)及8ml/(kg·d)。药物干预时间为8周。用药前后检测各组小鼠血、尿生化。采血结束后,左肾制作光镜、电镜切片;右肾-70℃冰箱冻存备用,采用RT-PCR检测小鼠肾脏KL m RNA的表达;采用Western-blot检测肾脏KL蛋白、Wnt1蛋白、β-catenin蛋白、nephrin蛋白、E-cadherin蛋白。结果药物干预期间,4只小鼠死亡,最终共58只小鼠纳入实验。给药前:B组、C组、D组、E组血、尿生化与A组比较明显升高(P<0.05);B组、C组、D组、E组组间比较无明显差异(P>0.05)。给药后:A组血、尿生化与给药前无明显差异(P>0.05);B组血、尿生化与给药前比较明显升高(P<0.05);C组、D组、E组尿生化、肾功能、血脂与给药前比较明显降低(P<0.05)但肝功能给药前比较无明显差异(P>0.05);肾脏病理:A组肾组织结构正常。B组肾小球肥大,毛细血管基底膜弥漫增厚,系膜基质增生,少量系膜细胞增生,足突融合、甚至脱落、纤维化明显、球囊扩张明显。药物干预治疗后肾脏病理结构较B组改善。各组小鼠肾脏KL m RNA及KL蛋白:B组、C组、D组、E组KL m RNA及KL蛋白与A组比较明显下降(P<0.05);C组、D组、E组与B组比较明显增强(P<0.05);C组与E组表达相当,但较D组上调(P<0.05)。Wnt1蛋白及β-catenin蛋白:B组、C组、D组、E组Wnt1及β-catenin蛋白表达与A组比较明显增多(P<0.05);C组、D组、E组与B组比较明显减少(P<0.05);C组与E组表达相当,但较D组下调(P<0.05)。nephrin蛋白:B组、C组、D组、E组nephrin蛋白表达与A组比较明显减少(P<0.05);C组、D组、E组与B组相比较明显增多(P<0.05);C组与D组表达相当,但较E组下调(P<0.05)。E-cadherin蛋白:B组、C组、D组、E组E-cadherin蛋白表达与A组比较明显减少(P<0.05);C组、D组、E组与B组相比较明显增多(P<0.05);C组与E组表达相当,但较D组下调(P<0.05)。结论1.单次腹腔注射STZ(150mg/kg)能成功诱导C57BL/6小鼠DN模型。2.糖尿病肾病模型小鼠发生蛋白尿、肾功能异常、糖及脂质代谢异常。3.肾安颗粒具有改善肾功能、减少蛋白尿、调节血糖及血脂代谢的作用,能延缓糖尿病肾病的进展。4.KL基因在DN小鼠模型的肾组织中表达下降,与Wnt1蛋白、β-catenin蛋白呈明显负相关,与nephrin蛋白、E-cadherin蛋白呈明显正相关,肾安颗粒可能通过上调KL基因的表达,抑制wnt/β-catenin通路的异常激活,抑制足细胞EMT,从而保护足细胞,改善蛋白尿及肾小球硬化,延缓糖尿病肾病的发展进程。