β-受体激动剂分为两大类:苯胺型类和苯酚型类。其中克伦特罗(Clenbuterol,CLE),属于苯胺型类β-受体激动剂;而莱克多巴胺(ractopamine,RAC),属于苯酚型类β-受体激动剂。将其作为动物的饲料添加剂,能显著提高饲料的转化率和瘦肉转化率。但其在动物体内的残留,会通过食物链进入到人体内,从而危害人类健康。它们也因此在全球范围内被禁用。本论文利用酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金免疫层析法(CGIA)建立了对β-受体激动剂多残留免疫检测的技术。获得的结果如下:1、以对羟基苯甲醛与硝基甲烷为起始物,并结合兰尼镍还原法,从头合成莱克多巴胺氨基衍生物,即RAC-NH2。以此生成物为起始物,与克伦特罗一样进行重氮化反应,分别合成出RAC-HSA、RAC-BSA、CLE-HSA和CLE-BSA。在此基础上,将RAC-NH2和CLE按照一定摩尔比混合,进行重氮化反应,通过紫外和SDS-PAGE鉴定,分别合成出免疫原CLE-HSA-RAC和包被原CLE-BSA-RAC。2、以合成出的CLE-HSA-RAC做为免疫原,采用常规免疫方法进行免疫小鼠,综合效价和灵敏度两个方面,选择2号小鼠进行冲击免疫,进行细胞融合试验。经过三轮亚克隆后,得到3A2和4D8两株稳定分泌抗CLE-RAC的细胞株,其中4D8这株细胞株分泌的单抗,对CLE-RAC的灵敏度最好,IC50值为0.325±0.021ng/mL,且有64000的效价。因此选择4D8细胞株注入小鼠体内,进行诱生腹水。3、以CLE-BSA-RAC人工抗原和CLE-RAC单克隆抗体(4D8)建立了检测CLE和RAC的间接竞争ELISA方法。此方法检测CLE和RAC时的IC50值为0.77ng/mL,最低检测限IC10为0.14 ng/mL。对克伦特罗、莱克多巴胺、马布特罗的交叉反应率很高(CR>96%)。同时对西布特罗、溴布特罗、马贲特罗、西玛特罗、班布特罗和克伦普罗也有一定的特异性(17%<CR<85%),实现了多残留检测。对其余的几种受体激动剂,没有交叉反应(CR<0.1%)。在实际样品检测时,猪尿、猪肉、猪肝和饲料的最低检测限分别是0.302、0.603、0.804和12.42ng/mL。而最低定量限则分别为:0.518、0.858、1.152和20.583 ng/mL。板内回收率为78%-118.00%,以及板间回收率为84.00%-114.00%。板内变异系数小于14.04%,板间变异系数小于7.69%。利用LC-MS/MS法验证,此方法是可靠的。4、采用柠檬酸钠还原法,制备了CLE-RAC胶体金标记抗体,同时成功制备出胶体金试纸条。肉眼对CLE和RAC等9种β-兴奋剂类药物的检测限可以达到5 ng/mL的水平,与前面结果icELISA结果一致,对β-兴奋剂类药物特异性较高,实现了多残留检测。同时检测时间较短,适合现场检测。本论文采用杂交瘤细胞技术,制备出CLE-RAC单抗,并建立了icELISA法和金标试纸条检测技术,为CLE和RAC等β-受体激动剂多残留提供了可靠的检测方法。