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诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PS cells)是一种新型干细胞,系经转入4个特定的转录因子(Oct 3/4,Sox2,Klf4、c-Myc)到小鼠或人的体细胞,诱导其重编程为未分化的多能细胞。它可分化成内皮细胞、平滑肌细胞和外膜细胞,通过移植hi PSCs衍生的这些细胞可以促进血管和肌肉的再生。针对局部缺血损伤,i PS细胞发挥其作用依赖于其定向富集于损伤部位。目的:本工作拟在i PS细胞,研究mi NA对i PS细胞的迁移、黏附影响;建立小鼠急性下肢缺血再灌注损伤缺血模型,观察i PS细胞是否对下肢缺血再灌注损伤有保护作用。方法:我们在成功制备出诱导多功能干细胞的前提下进行研究。首先体外研究:向i PS细胞转染consi RNA和mi RNA217观察转染后的i PS细胞迁移粘附的情况。体外:以C57BL/6J,8-10周龄雄性小鼠,制作小鼠下肢缺血再灌注损伤模型,右下肢作为对照组,分别在术后当天和第二天从尾静脉注射pbs、ips、mef(胚胎成纤维细胞)、controlsi RNA+ips、mi RNA-217+ips 6?104个/只/次/200ul.。细胞事先用红色荧光染料处理,观察72h后取材。结果:1、参照Yamanaka方法成功制备出诱导性多功能干细胞。2、给予mi RNA-217刺激i PS细胞后,对i PS细胞的迁移能力无明显影响。3、在急性小鼠缺血再灌注损伤模型,观察到ips形态呈梭形,ips细胞可以归巢到缺血/再灌注损伤的股动脉血管内膜。4、缺血再灌注损伤小鼠尾静脉注射ips细胞或MEF后28天,小鼠组织器官均无肉眼可见的肿瘤发生。5、尾静脉注射i PS细胞组较PBS和MEF组下肢缺血损伤侧肢体的血流灌注明显改善(*P<0.05),而经Lipo2000和mi RNA-217预处理的i PS组较单独注射i PSCs组的治疗效果明显下降(*P<0.05)。6、在损伤的后肢组织HE染色显示:i PS细胞组肌细胞核数量明显多于MEF、PBS、con-si RNA+i PS和mir RNA-217组,后4组的细胞数量、形态无明显差异(n=9)。7.Di I(呈红色荧光)标记的i PS细胞的定位显示,i PS组较consi RNA+i PS组和mi RNA-217+i PS 2组小鼠损伤组织中阳性细胞数明显多(P<0.05)。8.CD31免疫荧光化学方法检后肢缺血再灌注损伤部位小鼠肌肉组织血管的改变情况:阳性计数在PBS、MEF、i PS、con-si RNA+i PS、mi RNA217+i PS5组间比较无统计学差异。9.实时PCR检测显示:注射i PS和con-si RNA-i PS组在各个基因中的变化趋势一致。在i PS、con-si RNA-i PS、mi R-217-i PS 3个组的IL-1βm RNA表达水平比PBS(1±0.24)和MEF(0.86±0.4)明显升高,有统计学差异。IL-2m RNA在i PS组的表达明显高于其余4组。TNF-α和MCP-1基因在i PS组表达水平最低,与其余4组比较均有统计学差异。IGF-1表达水平在i PS、con-si RNA-i PS,mi R-217-i PS 3个组中的表达水平均较PBS和MEF组高(P<0.05)。其余基因在各组之间比较无统计学差异。10、Teto定量:IPS细胞组的总DNA中Teto含量最高,与PBS组和MEF组比,i PS细胞组和mi RNA217+i PS细胞组有显著性差异(*P<0.05);与其他细胞组相比,IPS细胞组Teto含量明显多(*P<0.05)。结论:i PS细胞可定向归巢到缺血/再灌注损伤部位,本实验剂量6?104个/只/次/200ul下无成瘤性,但能减小炎症梗死面积并改善血流恢复和下肢功能,i PS细胞对后肢缺血再灌注损伤治疗中具有靶向治疗和保护作用。mi RNA-217减轻i PS细胞的粘附,减弱i PS对后肢缺血再灌注损伤的的治疗作用。