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目的探讨人食管鳞癌组织中Rictor、p-Akt表达及临床意义,并探讨食管鳞癌细胞中Rictor表达水平与细胞对m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)敏感性的关系及分子机制。方法一、人食管鳞癌组织中Rictor、p-Akt表达及临床意义分析通过免疫组化法检测150例食管鳞癌组织和正常食管组织中Rictor和p-Akt的表达情况,并使用卡方检验、Spearman秩相关分析探讨二者在食管鳞癌中的临床意义。二、下调Rictor表达后细胞对m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)敏感性的变化1.用Lipo3000TM将Rictor-sh RNA和Control-sh RNA转染ECa109细胞,并用嘌呤霉素筛选稳定表达Rictor-sh RNA和Control-sh RNA的ECa109细胞株(ECa109-Rictor-sh RNA和ECa109-Control-sh RNA),免疫印迹法检测两株细胞中Rictor的表达情况。2.采用CCK-8法检测m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)对ECa109和EC9706细胞增殖的影响,并计算m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)作用食管鳞癌ECa109、EC9706细胞24h和48h的IC50。3.分别用ECa109-Rictor-sh RNA和ECa109-Control-sh RNA细胞建立裸鼠移植瘤模型,检测m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)对不同Rictor水平肿瘤生长的影响。4.采用H&E染色法和TUNEL法检测裸鼠移植瘤组织中细胞形态和细胞凋亡情况。三、下调Rictor表达后细胞对m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)敏感性变化的分子机制采用免疫印迹法体内外检测下调Rictor后m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)对PI3K/Akt/m TOR通路中相关因子表达的影响。结果一、人食管鳞癌组织中Rictor、p-Akt呈阳性表达并具有显著的临床意义食管鳞癌组织中Rictor及p-Akt的阳性表达率显著高于正常食管组织中的阳性表达率,且二者与患者的TNM分期具有显著相关性;食管鳞癌组织中Rictor表达水平与p-Akt表达水平呈正相关。二、下调Rictor表达后细胞对m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)敏感性增强1.成功筛选出稳定表达株ECa109-Rictor-sh RNA和ECa109-Control-sh RNA。免疫印迹法结果显示与后者相比,前者细胞中Rictor表达明显降低。2.CCK-8结果显示随着m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)浓度的增加及作用时间的延长,ECa109和EC9706细胞的存活率明显下降。依维莫司作用ECa109细胞24 h和48 h的IC50分别为52.18±1.72μM和19.04±1.28μM,依维莫司作用EC9706细胞24 h和48 h的IC50分别为52.07±1.72μM和17.07±1.23μM。PP242作用ECa109细胞24 h和48 h的IC50分别为11.28±1.05μM和4.07±1.61μM,PP242作用EC9706细胞24 h和48 h的IC50分别为13.84±1.14μM和3.46±0.54μM。3.裸鼠移植瘤结果显示与Control-sh RNA组相比,Rictor-sh RNA组和Control-sh RNA+m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)中肿瘤体积增加变慢,而Rictor-sh RNA+m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)组肿瘤体积增加最慢。与Control-sh RNA+m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)组相比,Rictor-sh RNA+m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)组的肿瘤体积增加明显变慢。4.H&E染色法结果显示与Control-sh RNA组相比,Rictor-sh RNA组和Control-sh RNA+m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)组中出现细胞皱缩和细胞核皱缩等与细胞凋亡相关的细胞形态,这种现象在Rictor-sh RNA+m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)组中更加明显。TUNEL法结果显示与Control-sh RNA组相比,Rictor-sh RNA组和Control-sh RNA+m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)组细胞凋亡率明显增加,而Rictor-sh RNA+m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)组肿瘤细胞凋亡率最高。三、下调Rictor表达后提高细胞对m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)敏感性的分子机制免疫印迹法体内外结果均表明和Control-sh RNA组相比,Rictor-sh RNA组和PP242组中p-Akt(Ser473)和p-PRAS40(Thr246)的蛋白表达明显降低;依维莫司组中p-Akt(Ser473)和p-PRAS40(Thr246)的蛋白表达升高。与依维莫司组相比,Rictor-sh RNA+依维莫司组细胞中p-Akt(Ser473)和p-PRAS40(Thr246)的蛋白表达明显降低。与PP242组相比,Rictor-sh RNA+PP242组细胞中p-Akt(Ser473)和p-PRAS40(Thr246)的蛋白表达明显降低。结论人食管鳞癌组织中Rictor和p-Akt(Ser473)异常激活并在食管鳞癌的发展中起重要作用;下调食管鳞癌细胞中Rictor表达能够提高细胞对m TOR抑制剂(依维莫司和PP242)的敏感性