目的:免疫组织化学和免疫细胞化学研究表明,胰岛主要有四类神经内分泌细胞所组成,即B、A、D和PP细胞,分别合成并分泌胰岛素、胰高血糖素、生长抑素和胰多肽等多肽类激素和单胺类物质。其中,B细胞数量最多,它所分泌的胰岛素作为体内唯一的降糖激素,也是唯一同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成的激素。对维持体内血糖的相对稳定,起着非常重要的作用。不同种属的动物,胰岛素的功能大体相同。胰岛素是由胰岛B细胞受内源性或外源性物质(如葡萄糖、乳糖、核糖、胰高血糖素等)的刺激,而分泌的一种蛋白质激素。由A、B两个肽链组成。胰岛素在B细胞粗面内质网的核蛋白体中合成后,以?颗粒的形式储存于B细胞中。传统知识认为,胰岛素等多肽激素通过毛细血管壁进入血液,需经肝门静脉途径转运并发挥作用,淋巴系统未参与胰岛素的吸收和转运。然而,有学者研究认为,淋巴管与内分泌细胞关系密切。根据毛细淋巴管的组织结构特点,其管径和通透性远远大于毛细血管,认为生物大分子胰岛素等多肽激素,更易于进入毛细淋巴管进行转运。此外,对于胸导管结扎后侧支循环能否很快建立,仍存在不同的结论。如果胰腺的淋巴回流被阻断,是否会对胰组织结构和糖代谢产生影响呢?基于此观点,本实验通过手术结扎家兔胸导管的方法,制备胰淋巴瘀滞的实验动物模型,对胰组织标本经常规HE染色,刚果红染色,胰淀肽免疫组织化学染色等,进行光镜和电镜观察。胰淀肽又称为糖尿病相关肽,是由37个氨基酸组成的多肽,与胰岛素共同储存在胰岛细胞的分泌颗粒中;也有研究表明,胰淀肽对胰岛细胞膜具有毒性作用,还可诱发胰岛素抵抗现象。在2型糖尿病的发生和发展过程中,胰岛素由正常或超量发展到分泌减少的变化,也与胰岛素淀粉样蛋白(胰淀肽)的沉积有关。因此,胰腺内出现胰淀肽沉积,是2型糖尿病患者胰腺内典型的病理特征。胰岛细胞被胰淀肽沉积取代的多少,决定了2型糖尿病的发展或严重程度。通过光镜和电镜,观察实验动物胰组织结构的形态学变化,并对正常和实验动物的血糖和体重进行比较。为探讨胰岛素等多肽激素的转运途径,胰淀肽在胰腺的沉积机制,提供形态学方面的依据。方法:1.实验动物与取材:选用健康成年家兔20只(由河北医科大学实验动物中心提供),雌雄不拘。随机分为两组。实验(手术)组和对照(假手术)组。为了在腹部手术时清晰显示乳糜池和胸导管,借鉴使用植物油灌胃使胸导管增粗呈乳白色的方法,向家兔胃内灌入食用油5-10毫升;观察发现,灌油后约3小时胸导管和乳糜池充盈最明显。然后,采用6%水合氯醛(30～35mg/kg)耳缘静脉麻醉。因为,胸导管的管壁非常薄,单独剥离结扎容易损伤;故采用临床食管癌手术中结扎胸导管的方法,将胸导管连同周围的结缔组织一并集束结扎,避免了单独结扎胸导管而引起的丝线割裂。而且,颈部结扎由于胸导管注入位置较低,容易造成胸膜顶破裂,导致气胸或由于静脉大出血致使实验动物死亡,故采用在腹部膈脚下、胸导管起始部进行结扎。假手术组只是将胸导管充分游离而不做结扎。术后实验动物常规喂养,每周采耳尖末梢血测血糖,测量前禁食8小时,并测量体重,观察两组家兔体重和血糖的变化,于术后6个月,在6%水合氯醛耳缘静脉深度麻醉下,处死动物后快速取家兔胰组织标本,用于光镜和电镜样品制备。2.光镜样品制备与观察:胰腺标本石蜡包埋的组织切片,进行苏木精-伊红染色和光镜观察;进行刚果红染色和光镜观察;进行胰淀肽免疫组织化学染色和光镜观察;显示两组动物胰组织细微结构的变化。3.透射电镜样品制备与观察:行常规透射电镜样品制备,胰腺标本超薄组织切片,行透射电镜观察;揭示实验动物胰腺(尤其是胰岛)的超微结构变化。结果:1.实验组家兔的血糖与对照组相比,术后血糖逐渐升高,差异具有显著性(P < 0.05);实验组家兔的平均体重,则低于对照组,两组差异具有显著性(P <0.05)。其中,实验组的2例动物,于术后16周出现明显的血糖升高,血糖高达7.5-8.2 mmol/L;并伴发体癣,后肢多处溃疡,体重下降明显。实验组家兔与对照组相比,胰腺外观颜色苍白,灰暗,似脂肪组织。2.光镜观察(1)在HE染色的组织切片上,实验组的胰腺小叶间隙明显增宽,结缔组织间隙内出现脂肪组织的堆积。大量腺泡细胞和胰岛细胞的胞浆呈空泡状。(2)在刚果红染色的胰组织切片上,胰腺小叶组织间隙显著增宽,结缔组织明显增生,大量脂肪组织堆积,胰岛呈现刚果红染色的朱红色着色反应。(3)胰淀肽免疫组织化学染色切片的光镜观察显示,在实验组动物的胰岛及其周围,呈现胰淀肽免疫反应强阳性棕褐色着色反应。3.透射电镜观察胰组织超薄切片透射电镜观察显示,实验组动物的胰岛细胞间隙增宽,甚至形成细胞间池样互相连通的管道结构;在细胞间隙内,可见大量脂滴样物质、淀粉样蛋白物质甚至形成细纤维团。结论:(1)胸导管结扎可导致胰淋巴瘀滞,引起实验家兔的体重,血糖及胰组织结构发生变化,这些变化可能与脂质和胰岛素等多肽激素的转运障碍有关。(2)实验性胰淋巴瘀滞及其胰组织结构的变化表明,胸导管手术结扎后,淋巴侧支循环并不能很快建立;因此,正常的淋巴回流,对于维持胰腺的内分泌功能,发挥重要作用。