【摘 要】
：
内毒素是所有种类革兰氏阴性菌外膜都具有的一种组成成分,被认为是细菌细胞死亡后释放的一类非具体生物分子,内毒素的生化描述为脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）,内毒素耐热、稳定性较强,所以可以长期存在于养殖场的环境中,对家畜造成严重的危害。哺乳动物的肠道是动物机体内最大的细菌微生物储存库。肠黏膜受损的情况下会使得LPS分子进入人体血液,引起内毒素血症。肠道黏液层是将共生菌和内毒素与
【基金项目】
：
陕西省重点研发计划（编号:2020NY-020）
论文部分内容阅读
内毒素是所有种类革兰氏阴性菌外膜都具有的一种组成成分,被认为是细菌细胞死亡后释放的一类非具体生物分子,内毒素的生化描述为脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）,内毒素耐热、稳定性较强,所以可以长期存在于养殖场的环境中,对家畜造成严重的危害。哺乳动物的肠道是动物机体内最大的细菌微生物储存库。肠黏膜受损的情况下会使得LPS分子进入人体血液,引起内毒素血症。肠道黏液层是将共生菌和内毒素与内部组织分隔开来,以抵抗外源性细菌和肠道微生物的侵袭,在维持肠道微生态平衡等方面发挥着重要作用。然而LPS对肠道黏膜屏障的结构有着怎样的影响,以及肠道中黏液层的重要组分黏蛋白MUC2发挥作用的机制研究尚不明确。本文以Caco-2/HT-29共培养细胞为体外试验模型,利用CCK8、Alcian/PAS染色、免疫荧光、si RNA、转录组测序、ELISA、和荧光定量PCR等技术,阐明了LPS对肠道上皮黏液层及细胞间紧密蛋白的作用,以及在MUC2基因表达降低的情况下,LPS对肠道上皮屏障的影响及其机制。已取得的研究结果如下:1.通过qPCR检测3:1（Caco-2:HT-29）和9:1（Caco-2:HT-29）共培养细胞三种基因MUC2、MUC5AC、ALPi的表达量,证明了3:1（Caco-2:HT-29）相比于9:1（Caco-2:HT-29）表达更高的黏蛋白mRNA,是更优的接种比例。通过CCK8细胞增殖毒性试验确定了400μg/m L是最适合的攻毒剂量,使用添加400μg/m L LPS的培养基处理3:1（Caco-2:HT-29）共培养细胞12h、24h、36h、48h,之后分别用Alcian和PAS染色法对其进行染色,对照组的共培养细胞在24h时分泌最多的酸性黏蛋白和黏多糖,LPS促进酸性黏蛋白和黏多糖的表达。共培养细胞免疫荧光染色结果表明LPS在24h、36h、48 h时损坏紧密连接蛋白Occludin。q PCR和ELISA结果表明LPS在24h时可显著性增加（P＜0.05）MUC2 m RNA和蛋白的表达。2.通过siRNA技术沉默Caco-2/HT-29共培养细胞中MUC2基因,荧光显微镜下观察到FAM荧光标记的阴性对照si RNA转染效率较高,q PCR检测转染后MUC2基因的表达较对照组极显著降低（P＜0.01）。转录组测序结果表明,与LPS（-）相比,LPS（+）组有较少的差异基因数,富集到较少的GO功能注释和KEGG信号通路,而不论是LPS（+）+si RNA组组相比于LPS（-）,还是LPS（+）+si RNA组相比于LPS（+）组,差异基因数、富集的GO功能注释和KEGG信号通路数都显著增加,表明在肠道黏液完整的情况下LPS几乎不对肠上皮产生影响,而当肠道黏蛋白的主要成分MUC2表达降低时,LPS对肠上皮的影响加重。3.通过对LPS（+）组和LPS（+）+siRNA组KEGG信号通路富集分析的数据挖掘,本试验发现在MUC2沉默的情况下,黏着斑和ECM受体相互作用信号通路差异显著,黏着斑通路共富集到38个差异基因和5个新基因,ECM-受体相互作用通路共富集到28个差异基因和1个新基因。通过q PCR对差异信号通路上的关键因子进行验证,结果与转录组测序一致。本试验还对LPS（+）组和LPS（+）+si RNA组细胞间连接因子Claudin-1、ZO-1、JAMA、Desmosome、Occludin、E-cadherin m RNA表达进行了检测,LPS（+）+si RNA组的Claudin-1、ZO-1、JAMA、Desmosome、Occludin、E-cadherin m RNA表达量均显著降低（P＜0.05）,表明在MUC2表达降低的情况下LPS对细胞间连接损伤增强,LPS破坏了紧密连接、黏附连接和桥粒。综上所述,LPS促近肠道杯状细胞分泌MUC2,使得肠道免受LPS的损伤。通过si RNA沉默肠道主要黏蛋白MUC2基因后,LPS引起了大量基因的表达差异,LPS对肠上皮的影响加重,其中黏着斑和ECM受体相互作用通路部分基因表达量显著降低。
其他文献
＜正＞随着生活节奏越来越快,人们只需要用热水冲泡方便面就能获得美味,方便面已经融入人们的日常生活。但是,对于方便面的负面评价也不绝于耳,说它是"垃圾食品",甚至"有毒""致癌"。那么,便宜美味又诱人的方便面到底是不是垃圾食品?它有没有营养价值呢?一方便面含有什么成分般来说,一份方便面分成两个部分:面饼和辅料包。面饼的制作很简单,通常是先把精白面粉蒸熟,再用棕榈油快速炸制,最后经过脱油处理,和辅料包
为获得空调用铜制截止阀阀体最小厚度处最大等效应力与盖帽螺母的拧紧力矩关系，利用非线性有限元求解器软件ABAQUS进行仿真计算，并通过测试盖帽螺母变形量对仿真计算结果进行试验验证，仿真与测试偏差均在5%以内，证明仿真数据可靠。研究结果表明：截止阀最小壁厚处达到该截止阀材料屈服强度时，盖帽螺母的拧紧力矩为28.8 N·m,满足标准要求；截止阀阀体应力达到材料抗拉强度时，盖帽螺母的拧紧力矩为113.7
[目的] 利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除anxa6基因的Caco-2细胞株，为研究大肠杆菌O157:H7效应蛋白EspF与宿主ANXA6蛋白相互作用及其致病机制奠定基础。[方法] 根据CRISPR/Cas9 靶向原理设计并合成3个特异性识别anxa6基因的向导RNA（sgRNA），基于LentiCRISPRv2载体构建LentiCRISPRv2-sgRNA重组质粒，转入293T细胞中，
试验旨在研究菌酶协同发酵饲料对蛋鸡生产性能、蛋品质、养分表观消化率及粪中氨气排放的影响。选取450只52周龄健康的京红蛋鸡，随机分为5组，每组6个重复，每个重复15只鸡。A组（对照组）蛋鸡饲喂玉米-豆粕型基础饲粮，B组、C组、D组、E组蛋鸡分别饲喂等蛋白替代5%、15%、25%、35%豆粕蛋白的发酵饲料的饲粮（即在饲粮中分别使用1.01%、2.88%、4.88%、7.00%发酵饲料）。预试期7 d
目的:研究分析布鲁氏杆菌引起的肾脏损害。方法:回顾性分析2010年5月-2018年5月在内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院经肾穿刺活检确诊的布鲁氏杆菌肾病患者4例，分析布氏杆菌引起肾脏损害的临床特征、病理类型及预后。同时结合文献总结该病的特点。结果:4例均有明确的牛羊接触布史，以发热、乏力起病，布氏杆菌凝集试验均阳性。患者血尿不明显，所有患者均有肾功能衰竭；2例是非甾体（利福平）引起的急性肾小管
实施改革开放以来,我国城镇化进程不断加速,促使政府加快农村集体土地的征收步伐。但由于政策不完善、程序不合规等原因致使政府在推进集体土地征收拆迁的过程中举步维艰,与被拆迁户的矛盾日益加重,严重阻碍地方社会经济的发展。本文运用产权理论、公共选择理论、帕累托最优理论,从政府城市化发展动因的显现和被拆迁户对安置补偿的诉求满足程度方面开展对W区集体土地房屋征收拆迁工作的研究。论文在数据资料梳理和问卷调查的基
本文从血证的病情观察、情志、生活起居、饮食等方面探讨了《血证论》的护理方法,从而赞誉了《血证论》辨证施护的学术思想。
深化“互联网+政务服务”平台建设是贯彻落实党和国家有关部署、深化“放管服”改革、全面推进政府治理体系和治理能力现代化的必然要求，也是顺应社会信息化趋势、提升政务服务质量和水平的必由之路。面对目前“互联网+政务服务”平台建设存在的问题与挑战，加强统筹协调、推进政府职能和政务流程再造，夯实基础设施建设、推进数据服务平台优化和均衡化，完善制度机制、推进政务服务平台规范化，突出普惠性、推进政务服务彰显地方
背景:精神分裂症是一类具有认知、情感、意志活动等多方面精神活动显著异常的重性精神疾病。近年来国内外有关精神分裂症患者出现动静脉栓塞的病例报道越来越多,引起临床的重视。目前国内精神分裂症住院患者尚无针对血栓性疾病的系统便捷的预防措施,多在出现症状后筛查凝血指标、D-二聚体、血管彩超等,门诊患者的预防和及时治疗更难以实施,可能导致延误诊治,造成不可挽回的后果。目的:通过比较不同性别、年龄、体重指数精神
猪布鲁氏杆菌病又被称为猪布病，是布鲁氏杆菌感染引起的一种人畜共患传染性疾病，还会威胁牛、羊等多种牲畜。随着生猪养殖产业集约化、规模化发展，出现布鲁氏杆菌感染会迅速向整个猪养殖领域传播蔓延。该文介绍了鲁氏杆菌病的发病特征与流行特点，阐述了该病的临床症状与病理学变化，提出针对性防控措施，确保养殖安全。