刺槐花总黄酮提取工艺及质量标准研究

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刺槐花系豆科植物刺槐(Robinia pseudoacacia L.)的干燥花及花萼。味涩,平,有小毒入肝经,收敛止血,主治咯血、大肠下血、崩漏。刺槐花具有较高的药用价值,具有消痈化淤,清热解毒,疗咽治痔,健胃通肠等功效。研究发现刺槐提取物对动物毛细管渗透性有增效作用;刺槐苷注射液在临床上可用于治疗急慢性肾炎、尿毒症、肾性高血压、膀胱炎和泌尿系统疾病,取得了较好的效果。对刺槐花的药用活性成分进行分离鉴定,研究发现刺槐苷纯品晶体具有抑菌、抗炎、利尿、健体活性,黄酮类化合物能抑制肿瘤细胞的活性。目的:1由于刺槐花总黄酮提取工艺研究未见报道,因此本文对刺槐花药材中总黄酮的提取工艺进行考察并测定含量,为刺槐花药材的开发利用提供科学参考。2建立刺槐花总黄酮标准提取物的质量标准,为其质量控制提供保障。起草《刺槐花总黄酮的质量标准草案及起草说明》,通过影响因素试验、加速试验和初步稳定试验,对刺槐花总黄酮的稳定性作了研究。3文献报道刺槐花的黄酮类成分具有抗癌活性,因此本文通过对刺槐花药材总黄酮的体外药理活性筛选,考察其对不同癌细胞的抗癌活性,为进一步扩大刺槐花药材的应用范围和探讨其抗癌机理提供参考。材料与方法:1材料:刺槐花:豆科植物刺槐Robinia psendo-acacia L.的干燥花。实验材料采自辽宁省沈阳等十个产地,由辽宁中医学院中药鉴定教研室提供并鉴定。2方法2.1通过单因素考察、正交试验确定刺槐花总黄酮的最佳提取工艺;利用静态吸附方法筛选刺槐花总黄酮的最适大孔树脂,利用动态吸附方法研究最适大孔树脂分离刺槐花总黄酮的条件。2.2以3批实验室放大实验得到的刺槐花总黄酮为研究对象,参照《中国药典》2010年版一部中药标准内容,对刺槐花总黄酮进行了性状、鉴别、检查等项目的质量标准研究;以刺槐苷、鼠李糖刺槐苷为对照品,建立了高效液相色谱法,对刺槐花总黄酮中2个黄酮类化合物的含量标准进行了研究,以刺槐苷为对照品,建立了紫外-可见分光光度法,对总黄酮的含量标准进行研究。2.3采用MTT还原法,筛选刺槐花总黄酮的体外抗肿瘤活性(人肝癌SMMC-7721细胞、人胃癌MGC-8细胞、人肠癌HT-29细胞)。结果:1经过单因素考察、正交试验结果,刺槐花总黄酮的最佳提取工艺为:40倍量75%乙醇提取2次,每次1 h,平均浸膏得率为53.2%,平均总黄酮含量为3.15% ,RSD<3% (n=3);通过静态吸附与解析实验,筛选了6种大孔树脂,确定用D101型大孔树脂来纯化刺槐花总黄酮,该树脂的最佳条件为:以2mL·min-1的流速上样后,用12倍量上柱树脂体积的75%乙醇的洗脱。2.首次起草了《刺槐花总黄酮的质量标准草案及起草说明》,通过影响因素试验、加速试验和初步稳定试验,对刺槐花总黄酮的稳定性作了研究。结果表明,刺槐花总黄酮性质稳定。3.通过MTT还原法实验发现,刺槐花总黄酮对癌细胞均有不同程度的抑制作用,对癌细胞的抑制作用为:人胃癌MGC-8细胞>人肠癌HT-29细胞﹥人肝癌SMMC-7721细胞。结论:1.首次对刺槐花总黄酮的提取工艺进行考察,最佳提取工艺条件稳定可行,可为刺槐花开发利用提供科学参考。筛选了适合刺槐花黄酮纯化的大孔树脂型号及纯化条件,为工业化生产得到更高纯度的总黄酮提取物提供了科学参考。2.首次起草了《刺槐花总黄酮的质量标准草案及起草说明》,通过影响因素试验、加速试验和初步稳定试验,对刺槐花总黄酮的稳定性作了研究。结果表明,刺槐花总黄酮性质稳定。3.通过MTT实验发现,人胃癌MGC-8细胞、人肠癌HT-29细胞、人肝癌SMMC-7721细胞在总黄酮作用下与未加药物的阴性对照组相比均有不同程度的增长抑制现象,浓度越大抑制作用越强。
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