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ESAT-6蛋白是从结核分支杆菌短期培养滤液(ST-CF)中纯化分离出的一种含有95个氨基酸的分子量约为9.9kD的分泌性蛋白。在远交系豚鼠模型和牛TB动物模型中，ESAT-6蛋白是免疫回忆效应性T细胞的主要靶抗原之一，可在再次结核感染的早期诱导其迅速增殖和释放高水平的IFN-γ，从而有效地激活巨噬细胞。而将ESAT-6蛋白辅以佐剂一磷酰基脂质A(MPL)制成亚单位疫苗，可诱导产生强烈的特异性T细胞反应和与BCG相当的保护效应。因此，ESAT-6蛋白可作为亚单位疫苗的组分或成为DNA疫苗的候选抗原以达到对TB长期、有效的预防。
为了获得ESAT-6蛋白的高效分泌表达，本文首先尝试将esat-6基因直接转入pichiapastorisGS115菌株中，但表达水平极低。由于α干扰素已经在酵母中成功地实现了高表达，因此作者尝试将α-2a干扰素和ESAT-6蛋白融合表达，既可以利用ESAT-6蛋白的免疫原性刺激人体产生抗体，又可以发挥干扰素的抗病毒和增强免疫力的功效。将人α-2a干扰素基因、结核分枝杆菌esat-6基因经PCR扩增并加上相应的酶切位点，以肠激酶识别的DNA序列作为接头，插入到分泌型载体pPIC9k中去。将重组质粒电击转入pichiapastorisSMD1168中，采用G418梯度筛选获得高抗性转化子。挑选高抗性转化子作摇瓶发酵，以甲醇作为诱导物，发酵4天后取上清，经Phenyl-sepharose6(FastFlow)疏水层析柱和DEAE-SepharoseF.F离子交换柱初步纯化，SDS-PAGE和Westernblot鉴定并分析表达产物中干扰素的活性。结果表明，重组菌株成功地分泌表达了分子量大小约为30kD的融合蛋白，表达产物不仅具有较高的干扰素活性，而且可以和结核病人血清发生特异性结合，为结核病的特异性诊断和新型结核病疫苗的研制打下了基础。