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本文分为以下几个部分: 第一部分:单克隆抗体的两种131I标记方法比较 目的: 分别采用N-琥珀酰亚胺-3-[正丁基锡]苯甲酸酯（ATE）、Iodogen法标记AC133.1单克隆抗体(mAb)，通过体外、体内实验比较两种标记法的优劣。 方法: 1.腹水法制备AC133.1mAb。 2.ATE法标记AC133.1mAb。131I与ATE反应得到中间产物N-琥珀酰亚胺-3[131I]苯甲酸酯（131I-SIB），采用高效液相色谱分离纯化131I-SIB，131I-SIB与AC133.1mAb在碱性环境(pH=8.7)下完成偶联。 3.Iodogen固相氧化法标记AC133.1mAb。 4.标记物在胎牛血清（FBS）中的稳定性实验。将上述标记物与适量体积的FBS混匀置于37℃环境中，于不同时刻（0d，1d，3d,7d）测定标记物的放化纯（RCP）。 5.通过细胞饱和实验测定标记抗体与相应抗原的平衡解离常数KD。 6.测定甲状腺及肿瘤组织的放射性分布，结果以％ID/g表示。 7.统计学方法：独立样本的t检验（SPSS statistics17.0）,P＜0.05为具有统计学差异。 结果: 1.AC133.1mAb的浓度为4μg/μl。 2.131I-SIB的紫外峰保留时间约11.0min,对应的放射峰保留时间约12.0min。ATE法标记的AC133.1mAb（131I-SIB-AC133.1mAb）的标记率为70.75±5.59%，RCP为91.05±1.53%；Iodogen法标记的AC133.1mAb(131I-AC133.1mAb)的标记率为71.02±7.00%，RCP为92.36±1.97%。 3.131I-SIB-AC133.1mAb在37℃下于FBS中的不同时刻（0d,1d,3d,7d）对应的RCP分别为:91.05±1.53%、89.52±1.64%、85.31±1.96%、79.64±1.33%； 131I-AC133.1mAb对应的RCP分别为：92.36±1.97%、90.14±1.36%、86.52±2.68%、81.20±3.75%。同一时间点，131I-SIB-AC133.1mAb的RCP与131I-AC133.1mAb相比无明显差异。 4.ATE法对应的KD为(4.76±0.30)×10-8M，Iodogen法对应的KD为(4.05±0.19)×10-8M，两种标记法所得的KD无明显差异（P=0.254）。 5.131I-SIB-AC133.1mAb在肿瘤组织不同时刻（1d，3d，5d，7d）的%ID/g分别为：4.63±0.07、8.61±0.34、7.28±0.11、6.62±0.16，131I-AC133.1mAb在肿瘤组织不同时刻（1d，3d，5d，7d）的%ID/g分别为：2.91±0.26、6.25±0.18、5.18±0.47、4.64±0.29，同一时刻（1d，3d，5d，7d）肿瘤组织对131I-SIB-AC133.1mAb的摄取高于131I-AC133.1mAb（对应为P=0.001，P＜0.001，P=0.002，P＜0.001）。 6.不同时刻（1d，3d，5d，7d）ATE法对应的甲状腺组织的放射性摄取分别为：0.99±0.12、0.82±0.05、0.74±0.21、0.35±0.05，不同时刻（1d，3d，5d，7d）Iodogen法对应的甲状腺组织放射性摄取分别为：2.48±0.18、2.05±0.26、1.76±0.34、1.32±0.13。同一时刻（1d，3d，5d，7d）Iodogen法对应的甲状腺组织放射性摄取高于ATE法（分别为P＜0.001,P=0.001,P=0.005,P＜0.001）。 结论: ATE法标记抗体具有较好的体内稳定性。 第二部分:靶向结肠癌干细胞放射免疫治疗的实验研究 目的: 本研究以CD133为结肠癌干细胞靶点，观测靶向CD133(+)肿瘤干细胞（CSCs）放射免疫治疗（RIT）对肿瘤生长的影响。 方法: 1.131I标记AC133.1单克隆抗体（mAb）采用N-琥珀酰亚胺-3[正丁基锡]苯甲酸酯法。 2.最大耐受剂量（MTD）实验，该实验在荷HCT116结肠癌模型鼠上进行。 3.描绘肿瘤生长曲线、记录裸鼠生存时间，并计算荷瘤裸鼠肿瘤体积倍增时间(VDT)及中位生存时间。 4.流式细胞学检测治疗结束后各组肿瘤组织的CD133的表达。 5.Western-blot检测治疗结束后各治疗组肿瘤组织中干细胞相关指标的表达，干细胞相关指标包括：CD133、ALDH1、Lgr5、E-cadherin、Vimentin、Snail1。 6.Ki67染色反映治疗结束后肿瘤组织的增值情况，结果以增值指数来表示。 7.治疗结束后各组肿瘤组织HE染色。 8.生物分布实验，了解标记物在体内的药代动力学特性，并根据生物分布结果计算出肿瘤组织的辐射吸收剂量。 结果: 1.荷HCT116结肠癌鼠的MTD为16.65MBq。 2.从肿瘤生长曲线可知，同一时刻131I-SIB-AC133.1mAb组对应的裸鼠肿瘤平均体积小于其它三组，生理盐水组、131I-IgG1组、AC133.1mAb组、131I-SIB-AC133.1mAb组对应的肿瘤VDT分别为6.29±0.78d、6.42±0.35d、6.89±0.30d、9.36±0.45d，131I-SIB-AC133.1mAb组的VDT较其它三组延长（P＜0.001）；生理盐水组的VDT与131I-IgG1、AC133.1mAb组相比无明显差异（对应为P=0.494、P=0.062），131I-IgG1组的VDT与AC133.1mAb组相比无明显差异（P=0.167）。 3.131I-SIB-AC133.1mAb组的生存率较其他三组延长（P＜0.001）。生理盐水组、131I-IgG1组、AC133.1mAb组及131I-SIB-AC133.1mAb组对应的裸鼠中位生存时间分别为27.8d、29.4d、32.6d、44.0d。 4.流式细胞术检测生理盐水组、131I-IgG1组、AC133.1mAb组及131I-SIB-AC133.1mAb组中肿瘤的CD133表达分别为21.70±1.61%、20.12±1.46%、18.24±2.53%、7.15±0.95%，131I-SIB-AC133.1mAb组CD133表达较其他三组降低（P＜0.001），生理盐水组CD133表达与131I-IgG1组、AC133.1mAb组相比无明显差异（相应为P=0.366、P=0.056），131I-IgG1组与AC133.1mAb组的CD133表达相比也无明显统计学差异差异（P=0.237）。 5.Western-blot显示131I-SIB-C133.1mAb组CD133、Lgr5、ALDH1、Vimentin、Snail1蛋白表达较其它三组下降，而E-cadherin蛋白表达较其他三组升高；其他三组干细胞相关指标表达相比未见明显差异。 6.生理盐水组、131I-IgG1组、AC133.1mAb组及131I-SIB-C133.1mAb组对应的细胞增值指数分别为41.56±2.52%、33.46±1.72%、28.60±2.88%、9.52±1.33%，131I-SIB-AC133.1mAb组细胞增值指数低于其它三组（P＜0.001）；生理盐水组增值指数较131I-IgG1组、AC133.1mAb组均高（对应为P=0.014、P=0.001），131I-IgG1组增值指数较AC133.1mAb组高（P=0.043）。 7.131I-SIB-AC133.1mAb组肿瘤组织HE染色显示有大片中央坏死区，而其他三组肿瘤组织内未见明显坏死。 8.131I-SIB-AC133.1mAb组肿瘤组织的平均辐射吸收剂量为5,966.34±54.90cGy。 结论: 靶向结肠癌干细胞的RIT能抑制肿瘤生长。