【摘 要】
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出于对生存环境的适应,铜绿假单胞菌进化出了各种高效的外排泵系统,例如药物外排泵,重金属离子外排泵等。借助这些排泵系统,细菌能够将进入其体内的有害物质排出体外。与此同
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出于对生存环境的适应,铜绿假单胞菌进化出了各种高效的外排泵系统,例如药物外排泵,重金属离子外排泵等。借助这些排泵系统,细菌能够将进入其体内的有害物质排出体外。与此同时,这些外排泵系统在细菌体内的表达被相应的调控蛋白精密的调控着。研究这些相应调控蛋白的结构和功能,有助于人们更透彻的理解细菌调节控制这些高效外排泵系统的分子机制。NalD蛋白质是铜绿假单胞菌中多药药物外排汞MexAB-OprM的一个转录调控蛋白,在对其进行蛋白质单晶生长的实验过程中,我们偶然发现PEG3350与NalD蛋白质在水溶液环境中存在着未被报道的特殊相互作用。通过使用SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳、基质辅助激光解离时间飞行质谱、动态激光光散射以及分析型超速离心等实验技术手段对这一现象进行了深入的研究后,我们发现NalD蛋白质在水溶液中与PEG3350之间的相互作用可能是通过NalD蛋白质中氨基酸残基上的羧基、羟基、氨基等侧链与PEG3350上醚氧键的氧形成氢键所产生的。这种相互作用的存在,使得NalD蛋白质能够在水溶液中与PEG3350形成一种具有较大表观分子质量,同时却有着较小流体力学尺寸的复合物。同时,我们对铜绿假单胞菌中与重金属离子抗性和亚胺培南抗性同时相关的调控蛋白CzcR进行了研究。并利用实时定量荧光PCR对不同锌离子浓度刺激下,铜绿假单胞菌中与重金属离子(Zn、Cd、Co)抗性和亚胺培南抗性相关的几个基因的转录水平进行了分析。结果表明随着刺激野生型铜绿假单胞菌时所使用Zn2+离子浓度的增加,细菌对Zn2+离子的抗性增强,同时其对亚胺培南的抗性也变得更强。
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