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猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus type 1,FHV-1)隶属疱疹病毒科,α-疱疹病毒亚科,是典型的大型DNA病毒。如今,FHV-1已在全世界猫科动物群体中流行,是导致猫科动物上呼吸道疾病和眼部疾病的主要病原体之一。目前,对于FHV-1感染的主要预防方式是注射疫苗,但是疫苗并不能对机体起到绝对的保护作用。该病在治疗方面无特异性治疗药物,与FHV-1产生特异性结合的抗体是治疗FHV-1感染合理的生物制品选择。因此制备出针对FHV-1的特异性抗体,对于该病临床FHV-1所引起的疾病的防治具有重大意义。
本研究对已知病毒株FHV-1CH-B株进行扩培和纯化,得到病毒TCID50为1011TCID50/mL的FHV-1浓缩液。将浓缩后的FHV-1浓缩液分别与弗氏佐剂、弗氏不完全佐剂按1:1混合直至完全乳化,制备成免疫原。然后按照制定的免疫程序对符合实验的实验动物--兔进行免疫,获得病毒中和抗体效价为1:1023的兔血清。通过饱和硫酸铵分步盐析法对血清进行IgG的粗提得到IgG溶液。将得到的IgG溶液利用胃蛋白酶进行酶切,并将酶切后的溶液通过Protein-G柱纯化,得到F(ab)2溶液。将F(ab)2溶液超滤浓缩,并对浓缩后的溶液进行浓度、纯度、反应活性、病毒中和抗体效价和安全性检测。最终得到反应活性和安全性良好,浓度为13.5mg/mL、纯度为98.801%、病毒中和效价为1:575.4的兔抗FHV-1免疫球蛋白F(ab)2溶液。基于实验室已建立的FHV-1幼猫感染模型,通过对幼猫攻毒前后接种不同剂量兔抗FHV-1免疫球蛋白F(ab)2,研究其对FHV-1感染的紧急预防作用和治疗效果。经对幼猫体温、体重、临床症状、死亡率、临床综合评分、排毒量、组织病毒载量和组织病变情况进行监测和观察。结果显示,与对照组相比,攻毒前后皮下注射10mg/mL和5mg/mL的兔抗FHV-1免疫球蛋白F(ab)2的实验组幼猫高温期更短、体重变化率更小、组织病变情况更轻微;相同时间内实验组幼猫临床症状减轻、死亡率降低,临床综合评分、排毒量和组织病毒载量明显减少。由此说明,本研究制备的兔抗FHV-1免疫球蛋白F(ab)2对FHV-1感染猫有一定的紧急预防效果和治疗作用,为FHV-1感染临床免疫制剂的研发提供了有益资料。
本研究对已知病毒株FHV-1CH-B株进行扩培和纯化,得到病毒TCID50为1011TCID50/mL的FHV-1浓缩液。将浓缩后的FHV-1浓缩液分别与弗氏佐剂、弗氏不完全佐剂按1:1混合直至完全乳化,制备成免疫原。然后按照制定的免疫程序对符合实验的实验动物--兔进行免疫,获得病毒中和抗体效价为1:1023的兔血清。通过饱和硫酸铵分步盐析法对血清进行IgG的粗提得到IgG溶液。将得到的IgG溶液利用胃蛋白酶进行酶切,并将酶切后的溶液通过Protein-G柱纯化,得到F(ab)2溶液。将F(ab)2溶液超滤浓缩,并对浓缩后的溶液进行浓度、纯度、反应活性、病毒中和抗体效价和安全性检测。最终得到反应活性和安全性良好,浓度为13.5mg/mL、纯度为98.801%、病毒中和效价为1:575.4的兔抗FHV-1免疫球蛋白F(ab)2溶液。基于实验室已建立的FHV-1幼猫感染模型,通过对幼猫攻毒前后接种不同剂量兔抗FHV-1免疫球蛋白F(ab)2,研究其对FHV-1感染的紧急预防作用和治疗效果。经对幼猫体温、体重、临床症状、死亡率、临床综合评分、排毒量、组织病毒载量和组织病变情况进行监测和观察。结果显示,与对照组相比,攻毒前后皮下注射10mg/mL和5mg/mL的兔抗FHV-1免疫球蛋白F(ab)2的实验组幼猫高温期更短、体重变化率更小、组织病变情况更轻微;相同时间内实验组幼猫临床症状减轻、死亡率降低,临床综合评分、排毒量和组织病毒载量明显减少。由此说明,本研究制备的兔抗FHV-1免疫球蛋白F(ab)2对FHV-1感染猫有一定的紧急预防效果和治疗作用,为FHV-1感染临床免疫制剂的研发提供了有益资料。