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帕金森病(parkinson’s disease,PD)是一种常见的中枢神经系统退行性病变,其典型病变是在黑质致密部、蓝斑神经元,上述部位多巴胺(dopamine,DA)能神经元出现变性、凋亡、缺失。脑肾素-血管紧张素系统(RAS)在调节神经炎症反应和多巴胺能(DA)神经元退行性病变的进展中起重要作用。血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)通过血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)诱导小胶质细胞活化介导的神经炎症与PD的病程有密切的关系,从而影响DA能神经元的功能。Endophilin A2(EP2)参与快速内皮素介导的胞吞作用(FEME)并迅速内吞几种G蛋白偶联受体(GPCR),而AT1R属于GPCR家族,因此,EP2可能通过内吞AT1R调节小胶质细胞激活。鸡豆黄素A(biochanin A,Bioch A)是一种异黄酮类植物雌激素,课题组前期研究表明Bioch A可以抑制由于LPS诱导的小胶质细胞发生的活化,但AngII诱导的小胶质细胞发生激活,进而引起DA能神经元的凋亡,其作用还不明确。目的:研究Bioch A对AngⅡ诱导的DA能神经元损伤的改善作用及其机制。方法:采用随机分组法将SD大鼠分成以下6组:假手术组、AngⅡ(5μg/3μl)模型组、Losartan对照组和鸡豆黄素A不同浓度给药组(AngⅡ+Bioch A(16mg/kg)、AngⅡ+Bioch A(32mg/kg)、AngⅡ+Bioch A(64mg/kg))。用脑部立体定位仪精准定位在大鼠大脑黑质致密部处,注射AngⅡ引发DA能神经元的损伤状态从而制备模型,假手术组注射等体积生理盐水。注射后24h苏醒,Bioch A组按相应浓度梯度灌胃给药,Losartan组也灌胃给药。注射后第7天,各组大鼠开始观察各行为学指标的改变。接着,各组大鼠腹腔注射阿朴吗啡,检测并记录旋转圈数,实验结束后立即断头处死,取组织待检。采用免疫组织化学法(IHC-P),观察小胶质细胞的活化和DA能神经元的状态,Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)、Endophilin A2(EP2)。采用免疫蛋白印迹法(western blot),检测大脑黑质致密部α-突触蛋白(α-synuclein)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-likeprotein containing CARD,ASC)、gp91phox、p22phox、IL-1β(interleukin1β,L-1β)、IL-6(interleukin-6)、IL-18(interleukin-18,IL-18)、TNF-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达情况。结果:1)对模型大鼠行为学影响结果:与假手术组相比,AngⅡ组大鼠的自由活动能力出现不同程度降低;与AngⅡ组相比,Bioch A组大鼠的自发活动及探索行为均有不同程度提高。2)诱导旋转结果:AngⅡ组大鼠腹腔注射阿扑吗啡出现向健康侧旋转的现象,且Bioch A组旋转次数少于AngⅡ组。3)对模型大鼠病理学影响:假手术组大鼠黑质致密部中DA能神经元饱满且数目多,小胶质细胞数量较少且大多数处于沉默状态;而AngⅡ组,DA能神经元大多形态发生变化最后凋亡、缺失,胞体萎缩,同时小胶质细胞激活明显增多,呈“阿米巴样”;与AngⅡ组相比,Bioch A组减少了小胶质细胞活化数量和降低DA能神经元损伤程度。4)对模型大鼠NLRP3炎症小体影响:AngⅡ组NLRP3蛋白表达升高,而Bioch A组降低了NLRP3表达量;Western blot观察结果:AngⅡ组Caspase-1和ASC蛋白表达量升高,Bioch A组显著降低Caspase-1和ASC蛋白表达水平。5)对模型大鼠氧化亚基的影响:AngⅡ组gp91phox和p22phox表达量升高,但Bioch A组降低了gp91phox和p22phox表达量。6)对模型大鼠炎症因子的影响:AngⅡ组IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α表达量升高,Bioch A组降低IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α。7)对模型大鼠吞蛋白和AT1R的影响:AngⅡ组EP2表达降低,AT1R表达升高,但Bioch A组促进EP2蛋白表达,降低AT1R表达水平。结论:Bioch A对AngⅡ诱导的DA能神经元损伤模型大鼠具有保护作用,其机制可能与Bioch A抑制AngII诱导小胶质细胞的活化,通过抑制NADPH氧化酶和NLRP3炎症小体的活性,其进一步机制可能与EP2和AT1R之间的相互作用有关。