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目的 本研究用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chainreaction简称RT-PCR)的方法获得S100B基因，构建表达S100B蛋白的重组质粒，使之高效表达S100B蛋白。研究表达蛋白质的生物学活性，并通过亲和层析的方法纯化融合蛋白，为S100B作用机制和应用研究奠定基础。 方法 应用RT-PCR的方法获得S100B基因，插入克隆载体，鉴定重组质粒并进行基因序列测定和分析；纯化S100B基因片段并插入原核表达载体，诱导表达目的蛋白，鉴定融合蛋白S100B蛋白-麦芽糖结合蛋白(S100B-MBP蛋白，简称MBS)。利用亲和层析方法纯化MBS蛋白；获得融合蛋白的免疫血清，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清S100B抗体效价，蛋白印迹法(Western blot)检验融合蛋白的生物学活性。 结果 1、含S100B基因的重组质粒S100B-pMD 18T vector(简称pTS)，经双酶切后和特异PCR，证实S100B基因的重组克隆质粒构建成功。经测序，S100B基因全长320bp。GenBank公布的人S100B相应基因同源性达99％。 2、构建了表达MBS融合蛋白的原核表达系统，其在全菌蛋白中的含量为31％，以可溶性成分为主。通过亲和层析纯化融合蛋白MBS，蛋白纯度达91％，纯化效果良好。郑州大学硕士学位论文5100B基因的克隆、原核表达及生物学活性研究 3.纯化后的融合蛋白可以被兔血清识别，证明纯化后的融合蛋白仍具有较好的反应原性。MBS融合蛋白可以刺激机体产生相应抗体，具有免疫原性。 结论 1.成功构建了S10OB基因重组克隆质粒，经酶切鉴定、PCR特异性鉴定和序列分析证实为目的基因。 2.原核表达系统可高效表达MBS融合蛋白。经亲和层析纯化可获得高纯度的融合蛋白。 3.纯化的融合表达蛋白MBS具有较强的生物学活性。该研究为进一步研究5100蛋白的分子作用机制以及建立高敏感度和高特异度的检测方法奠定基础。